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微生物产黄曲霉毒素B1降解酶的发酵过程优化及其降解机制研究

摘要第4-5页
Abstract第5页
第1章 引言第11-26页
    1.1 黄曲霉毒素简介第11-13页
        1.1.1 黄曲霉毒素发现历史第11-12页
        1.1.2 黄曲霉毒素种类、结构第12-13页
    1.2 黄曲霉毒素B_1毒性及致毒机理第13-14页
    1.3 黄曲霉毒素B_1检测方法第14-16页
        1.3.1 薄层层析法(TLC)第15页
        1.3.2 酶联免疫吸附(ELISA)第15页
        1.3.3 高效液相色谱(HPLC)第15-16页
    1.4 黄曲霉毒素B_1限量标准第16页
    1.5 黄曲霉毒素B_1去除方法第16-25页
        1.5.1 预防AFB_1的污染第17页
        1.5.2 物理法去除AFB_1第17-18页
        1.5.3 化学法去除AFB_1第18-19页
        1.5.4 生物法去除AFB_1第19-25页
            1.5.3.1 竞争或抑制第19-20页
            1.5.3.2 吸附第20-21页
            1.5.3.3 降解或转化第21-25页
    1.6 本研究的目的及意义第25-26页
第2章 高效降解AFB_1菌株的筛选及鉴定第26-33页
    2.1 实验材料第26-27页
        2.1.1 菌种第26页
        2.1.2 培养基第26页
        2.1.3 主要试剂第26-27页
        2.1.4 主要仪器设备第27页
    2.2 分析方法第27-28页
        2.2.1 AFB_1检测方法(HPLC法)第27-28页
        2.2.2 生物量的测定:干重法第28页
    2.3 试验方法第28-29页
        2.3.1 降解AFB_1菌株的筛选第28-29页
            2.3.1.1 菌种活化第28页
            2.3.1.2 种子液制备第28-29页
            2.3.1.3 发酵优选高效降解AFB_1菌株第29页
        2.3.2 菌种鉴定第29页
    2.4 结果与讨论第29-32页
        2.4.1 降解AFB_1优势菌的筛选第29-30页
        2.4.2 菌种鉴定第30-32页
    2.5 小结第32-33页
第3章 HSK8降解AFB_1发酵工艺优化第33-52页
    3.1 材料第33-34页
        3.1.1 菌种第33页
        3.1.2 培养基第33页
        3.1.3 试剂第33-34页
        3.1.4 仪器设备第34页
    3.2 实验方法第34-39页
        3.2.1 出发菌株种子生长曲线的测定第35-36页
            3.2.1.1 改善菌丝结团方法第35页
            3.2.1.2 表面活性剂的添加量的优化第35页
            3.2.1.3 HSK8生长曲线的测定第35-36页
        3.2.2 发酵条件的优化第36-37页
            3.2.2.1 发酵温度的优化实验第36页
            3.2.2.2 装液量的优化实验第36页
            3.2.2.3 接种量的优化实验第36页
            3.2.2.4 发酵周期的优化实验第36页
            3.2.2.5 发酵液初始pH的优化实验第36-37页
        3.2.3 发酵培养基的优化第37-39页
            3.2.3.1 碳源的优化第37页
            3.2.3.2 AFB_1与发酵上清液反应时间的选择第37页
            3.2.3.3 碳源添加量的优化第37页
            3.2.3.4 氮源及其添加量的优化第37页
            3.2.3.5 金属离子及其添加量的优化第37-38页
            3.2.3.6 FeSO_4·7H_2O添加与否研究第38页
            3.2.3.7 正交试验第38页
            3.2.3.8 正交验证实验第38页
            3.2.3.9 AFB_1与发酵上清液反应时间对AFB_1降解率的影响第38-39页
    3.3 实验结果及分析第39-50页
        3.3.1 生长曲线的绘制第39-40页
            3.3.1.1 菌株HSK8种子液中菌丝结团现象的改善第39页
            3.3.1.2 吐温80添加量的优化第39-40页
            3.3.1.3 HSK8生长曲线第40页
        3.3.2 发酵条件的优化第40-44页
            3.3.2.1 HSK8发酵温度的优化第41页
            3.3.2.2 装液量的优化第41-42页
            3.3.2.3 枝孢接种量的优化第42页
            3.3.2.4 发酵周期的优化第42-43页
            3.3.2.5 初始pH的优化实验第43-44页
        3.3.3 发酵培养基优化第44-50页
            3.3.3.1 碳源的优化第44-45页
            3.3.3.2 反应时间对AFB_1降解率的影响第45页
            3.3.3.3 玉米芯粉添加量的优化第45-46页
            3.3.3.4 氮源及其添加量的优化第46-47页
            3.3.3.5 金属离子及其添加量的优化第47-48页
            3.3.3.6 FeSO_4·7H_2O添加与否对AFB_1降解率的影响第48页
            3.3.3.7 正交试验第48-50页
            3.3.3.8 正交验证试验第50页
            3.3.3.9 反应时间对AFB_1降解率的影响(培养基优化后)第50页
    3.4 小结第50-52页
第4章 AFB_1降解机制研究第52-69页
    4.1 材料第52-54页
        4.1.1 菌种第52页
        4.1.2 培养基第52页
        4.1.3 试剂第52-53页
        4.1.4 仪器设备第53-54页
    4.2 分析方法第54-55页
        4.2.1 TLC法检测AFB_1第54-55页
    4.3 试验方法第55-57页
        4.3.1 发酵周期优化时第55-56页
            4.3.1.1 AFB_1降解产物的检测第55页
            4.3.1.2 AFB_1降解产物LC-MS分析第55-56页
            4.3.1.3 AFB_1降解机制的预测第56页
            4.3.1.4 初步探索C. uredinicola对AFB_1的降解是否是酶的作用第56页
        4.3.2 碳源优化过程中第56页
        4.3.3 培养基优化后第56-57页
            4.3.3.1 AFB_1转化产物的探寻第56-57页
            4.3.3.2 转化AFB_1活性物质的探寻第57页
    4.4 实验结果与分析第57-67页
        4.4.1 发酵周期优化时第57-64页
            4.4.1.1 AFB_1降解产物的检测第57-60页
            4.4.1.2 AFB_1降解产物LC-MS分析及其降解机制预测第60-62页
            4.4.1.3 初步探索C. uredinicola对AFB_1的生物转化是否是酶的作用第62-63页
            4.4.1.4 NaNO_3添加量对AFB_1生物转化率的影响第63-64页
        4.4.2 碳源优化过程中降解产物的检测第64-65页
        4.4.3 培养基优化后第65-67页
            4.4.3.1 AFB_1降解产物的检测第65-66页
            4.4.3.2 转化AFB_1活性物质探寻第66-67页
    4.5 小结第67-69页
第5章 AFB_1转化后细胞毒性试验第69-76页
    5.1 材料第69-71页
        5.1.1 菌种第69页
        5.1.2 培养基第69页
        5.1.3 试剂第69-70页
        5.1.4 仪器设备第70-71页
    5.2 分析方法第71-72页
    5.3 试验方法第72-73页
        5.3.1 AFB_1反应浓度对AFB_1降解率的影响第72页
        5.3.2 细胞毒性试验第72-73页
    5.4 实验结果第73-74页
        5.4.1 AFB_1浓度对其生物转化率的影响第73页
        5.4.2 细胞毒性试验第73-74页
    5.5 小结第74-76页
第6章 总结与展望第76-78页
    6.1 总结第76页
    6.2 创新点第76-77页
    6.3 展望第77-78页
参考文献第78-87页
致谢第87-88页
附录第88页

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