摘要 | 第4-5页 |
Abstract | 第5页 |
第1章 引言 | 第11-26页 |
1.1 黄曲霉毒素简介 | 第11-13页 |
1.1.1 黄曲霉毒素发现历史 | 第11-12页 |
1.1.2 黄曲霉毒素种类、结构 | 第12-13页 |
1.2 黄曲霉毒素B_1毒性及致毒机理 | 第13-14页 |
1.3 黄曲霉毒素B_1检测方法 | 第14-16页 |
1.3.1 薄层层析法(TLC) | 第15页 |
1.3.2 酶联免疫吸附(ELISA) | 第15页 |
1.3.3 高效液相色谱(HPLC) | 第15-16页 |
1.4 黄曲霉毒素B_1限量标准 | 第16页 |
1.5 黄曲霉毒素B_1去除方法 | 第16-25页 |
1.5.1 预防AFB_1的污染 | 第17页 |
1.5.2 物理法去除AFB_1 | 第17-18页 |
1.5.3 化学法去除AFB_1 | 第18-19页 |
1.5.4 生物法去除AFB_1 | 第19-25页 |
1.5.3.1 竞争或抑制 | 第19-20页 |
1.5.3.2 吸附 | 第20-21页 |
1.5.3.3 降解或转化 | 第21-25页 |
1.6 本研究的目的及意义 | 第25-26页 |
第2章 高效降解AFB_1菌株的筛选及鉴定 | 第26-33页 |
2.1 实验材料 | 第26-27页 |
2.1.1 菌种 | 第26页 |
2.1.2 培养基 | 第26页 |
2.1.3 主要试剂 | 第26-27页 |
2.1.4 主要仪器设备 | 第27页 |
2.2 分析方法 | 第27-28页 |
2.2.1 AFB_1检测方法(HPLC法) | 第27-28页 |
2.2.2 生物量的测定:干重法 | 第28页 |
2.3 试验方法 | 第28-29页 |
2.3.1 降解AFB_1菌株的筛选 | 第28-29页 |
2.3.1.1 菌种活化 | 第28页 |
2.3.1.2 种子液制备 | 第28-29页 |
2.3.1.3 发酵优选高效降解AFB_1菌株 | 第29页 |
2.3.2 菌种鉴定 | 第29页 |
2.4 结果与讨论 | 第29-32页 |
2.4.1 降解AFB_1优势菌的筛选 | 第29-30页 |
2.4.2 菌种鉴定 | 第30-32页 |
2.5 小结 | 第32-33页 |
第3章 HSK8降解AFB_1发酵工艺优化 | 第33-52页 |
3.1 材料 | 第33-34页 |
3.1.1 菌种 | 第33页 |
3.1.2 培养基 | 第33页 |
3.1.3 试剂 | 第33-34页 |
3.1.4 仪器设备 | 第34页 |
3.2 实验方法 | 第34-39页 |
3.2.1 出发菌株种子生长曲线的测定 | 第35-36页 |
3.2.1.1 改善菌丝结团方法 | 第35页 |
3.2.1.2 表面活性剂的添加量的优化 | 第35页 |
3.2.1.3 HSK8生长曲线的测定 | 第35-36页 |
3.2.2 发酵条件的优化 | 第36-37页 |
3.2.2.1 发酵温度的优化实验 | 第36页 |
3.2.2.2 装液量的优化实验 | 第36页 |
3.2.2.3 接种量的优化实验 | 第36页 |
3.2.2.4 发酵周期的优化实验 | 第36页 |
3.2.2.5 发酵液初始pH的优化实验 | 第36-37页 |
3.2.3 发酵培养基的优化 | 第37-39页 |
3.2.3.1 碳源的优化 | 第37页 |
3.2.3.2 AFB_1与发酵上清液反应时间的选择 | 第37页 |
3.2.3.3 碳源添加量的优化 | 第37页 |
3.2.3.4 氮源及其添加量的优化 | 第37页 |
3.2.3.5 金属离子及其添加量的优化 | 第37-38页 |
3.2.3.6 FeSO_4·7H_2O添加与否研究 | 第38页 |
3.2.3.7 正交试验 | 第38页 |
3.2.3.8 正交验证实验 | 第38页 |
3.2.3.9 AFB_1与发酵上清液反应时间对AFB_1降解率的影响 | 第38-39页 |
3.3 实验结果及分析 | 第39-50页 |
3.3.1 生长曲线的绘制 | 第39-40页 |
3.3.1.1 菌株HSK8种子液中菌丝结团现象的改善 | 第39页 |
3.3.1.2 吐温80添加量的优化 | 第39-40页 |
3.3.1.3 HSK8生长曲线 | 第40页 |
3.3.2 发酵条件的优化 | 第40-44页 |
3.3.2.1 HSK8发酵温度的优化 | 第41页 |
3.3.2.2 装液量的优化 | 第41-42页 |
3.3.2.3 枝孢接种量的优化 | 第42页 |
3.3.2.4 发酵周期的优化 | 第42-43页 |
3.3.2.5 初始pH的优化实验 | 第43-44页 |
3.3.3 发酵培养基优化 | 第44-50页 |
3.3.3.1 碳源的优化 | 第44-45页 |
3.3.3.2 反应时间对AFB_1降解率的影响 | 第45页 |
3.3.3.3 玉米芯粉添加量的优化 | 第45-46页 |
3.3.3.4 氮源及其添加量的优化 | 第46-47页 |
3.3.3.5 金属离子及其添加量的优化 | 第47-48页 |
3.3.3.6 FeSO_4·7H_2O添加与否对AFB_1降解率的影响 | 第48页 |
3.3.3.7 正交试验 | 第48-50页 |
3.3.3.8 正交验证试验 | 第50页 |
3.3.3.9 反应时间对AFB_1降解率的影响(培养基优化后) | 第50页 |
3.4 小结 | 第50-52页 |
第4章 AFB_1降解机制研究 | 第52-69页 |
4.1 材料 | 第52-54页 |
4.1.1 菌种 | 第52页 |
4.1.2 培养基 | 第52页 |
4.1.3 试剂 | 第52-53页 |
4.1.4 仪器设备 | 第53-54页 |
4.2 分析方法 | 第54-55页 |
4.2.1 TLC法检测AFB_1 | 第54-55页 |
4.3 试验方法 | 第55-57页 |
4.3.1 发酵周期优化时 | 第55-56页 |
4.3.1.1 AFB_1降解产物的检测 | 第55页 |
4.3.1.2 AFB_1降解产物LC-MS分析 | 第55-56页 |
4.3.1.3 AFB_1降解机制的预测 | 第56页 |
4.3.1.4 初步探索C. uredinicola对AFB_1的降解是否是酶的作用 | 第56页 |
4.3.2 碳源优化过程中 | 第56页 |
4.3.3 培养基优化后 | 第56-57页 |
4.3.3.1 AFB_1转化产物的探寻 | 第56-57页 |
4.3.3.2 转化AFB_1活性物质的探寻 | 第57页 |
4.4 实验结果与分析 | 第57-67页 |
4.4.1 发酵周期优化时 | 第57-64页 |
4.4.1.1 AFB_1降解产物的检测 | 第57-60页 |
4.4.1.2 AFB_1降解产物LC-MS分析及其降解机制预测 | 第60-62页 |
4.4.1.3 初步探索C. uredinicola对AFB_1的生物转化是否是酶的作用 | 第62-63页 |
4.4.1.4 NaNO_3添加量对AFB_1生物转化率的影响 | 第63-64页 |
4.4.2 碳源优化过程中降解产物的检测 | 第64-65页 |
4.4.3 培养基优化后 | 第65-67页 |
4.4.3.1 AFB_1降解产物的检测 | 第65-66页 |
4.4.3.2 转化AFB_1活性物质探寻 | 第66-67页 |
4.5 小结 | 第67-69页 |
第5章 AFB_1转化后细胞毒性试验 | 第69-76页 |
5.1 材料 | 第69-71页 |
5.1.1 菌种 | 第69页 |
5.1.2 培养基 | 第69页 |
5.1.3 试剂 | 第69-70页 |
5.1.4 仪器设备 | 第70-71页 |
5.2 分析方法 | 第71-72页 |
5.3 试验方法 | 第72-73页 |
5.3.1 AFB_1反应浓度对AFB_1降解率的影响 | 第72页 |
5.3.2 细胞毒性试验 | 第72-73页 |
5.4 实验结果 | 第73-74页 |
5.4.1 AFB_1浓度对其生物转化率的影响 | 第73页 |
5.4.2 细胞毒性试验 | 第73-74页 |
5.5 小结 | 第74-76页 |
第6章 总结与展望 | 第76-78页 |
6.1 总结 | 第76页 |
6.2 创新点 | 第76-77页 |
6.3 展望 | 第77-78页 |
参考文献 | 第78-87页 |
致谢 | 第87-88页 |
附录 | 第88页 |