脂质体转染的癌细胞的蛋白质组研究
| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5页 |
| 第一章 绪论 | 第10-19页 |
| 1.1 基因治疗 | 第10-11页 |
| 1.1.1 病毒载体 | 第11页 |
| 1.1.2 非病毒载体 | 第11页 |
| 1.2 阳离子脂质体 | 第11-15页 |
| 1.2.1 脂质体 | 第11-12页 |
| 1.2.2 阳离子脂质体 | 第12-13页 |
| 1.2.3 阳离子脂质体/DNA复合物 | 第13-14页 |
| 1.2.4 转染效率影响因素 | 第14页 |
| 1.2.5 阳离子脂质体细胞毒性研究 | 第14-15页 |
| 1.3 蛋白质组学及其研究方法 | 第15-18页 |
| 1.3.1 蛋白质组学 | 第15页 |
| 1.3.2 蛋白质组学研究方法 | 第15-18页 |
| 1.3.2.1 SILAC技术 | 第16页 |
| 1.3.2.2 MRM技术 | 第16页 |
| 1.3.2.3 iTRAQ技术 | 第16-18页 |
| 1.3.2.4 蛋白质定量技术比较 | 第18页 |
| 1.4 本课题研究工作 | 第18-19页 |
| 1.4.1 本课题研究内容 | 第18页 |
| 1.4.2 本课题研究意义 | 第18-19页 |
| 第二章 Hep-2 细胞的传代培养及脂质体转染 | 第19-23页 |
| 2.1 引言 | 第19页 |
| 2.2 实验材料 | 第19-20页 |
| 2.2.1 实验细胞和阳离子脂质体 | 第19-20页 |
| 2.2.2 实验药品及试剂 | 第20页 |
| 2.2.3 实验仪器 | 第20页 |
| 2.3 实验方法 | 第20-21页 |
| 2.3.1 Hep-2 细胞的传代培养 | 第20-21页 |
| 2.3.1.1 培养基配制方法 | 第20页 |
| 2.3.1.2 细胞复苏 | 第20-21页 |
| 2.3.1.3 细胞传代培养 | 第21页 |
| 2.3.2 阳离子脂质体转染Hep-2 细胞 | 第21页 |
| 2.3.3 Hep-2 细胞倒置荧光显微镜观察 | 第21页 |
| 2.4 结果与讨论 | 第21-23页 |
| 2.4.1 基因表达分析 | 第21-23页 |
| 第三章 脂质体转染的Hep-2 细胞双向电泳分析 | 第23-31页 |
| 3.1 引言 | 第23页 |
| 3.2 实验材料 | 第23-25页 |
| 3.2.1 实验组与空白组选择 | 第23页 |
| 3.2.2 实验药品及试剂 | 第23-24页 |
| 3.2.3 实验仪器 | 第24-25页 |
| 3.3 实验方法 | 第25-29页 |
| 3.3.1 Hep-2 细胞收集 | 第25页 |
| 3.3.2 Hep-2 细胞总蛋白的制备 | 第25-26页 |
| 3.3.3 蛋白质标准曲线的绘制 | 第26-27页 |
| 3.3.4 Hep-2 细胞蛋白浓度测定 | 第27页 |
| 3.3.5 双向凝胶电泳 | 第27-28页 |
| 3.3.5.1 样品制备 | 第27页 |
| 3.3.5.2 第一向等电聚焦 | 第27页 |
| 3.3.5.3 IPG胶条平衡 | 第27-28页 |
| 3.3.5.4 SDS-PAGE电泳 | 第28页 |
| 3.3.6 与质谱兼容的银氨染色（银染法） | 第28页 |
| 3.3.7 凝胶图像分析 | 第28-29页 |
| 3.4 结果与讨论 | 第29-31页 |
| 3.4.1 Hep-2 细胞双向电泳图谱分析 | 第29-30页 |
| 3.4.2 空白组与对照组图谱比对 | 第30-31页 |
| 第四章 同位素标记相对和绝对定量分析 | 第31-55页 |
| 4.1 引言 | 第31页 |
| 4.2 实验药品与仪器 | 第31-32页 |
| 4.2.1 实验药品及试剂 | 第31页 |
| 4.2.2 实验仪器 | 第31-32页 |
| 4.3 实验方法 | 第32-34页 |
| 4.3.1 Hep-2 细胞蛋白质提取 | 第32页 |
| 4.3.2 胰酶消化 | 第32页 |
| 4.3.3 多肽的iTRAQ标记 | 第32-33页 |
| 4.3.4 iTRAQ标记多肽的反相色谱分离 | 第33页 |
| 4.3.5 LC-MS/MS进行定量蛋白质组分析 | 第33-34页 |
| 4.4 实验结果 | 第34-40页 |
| 4.4.1 质量误差分布 | 第34-35页 |
| 4.4.2 蛋白质鉴定结果 | 第35页 |
| 4.4.3 肽段序列长度分布 | 第35页 |
| 4.4.4 差异蛋白定量统计 | 第35-40页 |
| 4.5 差异蛋白GO注释 | 第40-42页 |
| 4.5.1.生物学过程 | 第40-41页 |
| 4.5.2 细胞组分 | 第41-42页 |
| 4.5.3 分子功能 | 第42页 |
| 4.6 差异蛋白亚细胞定位 | 第42-43页 |
| 4.7 富集分析 | 第43-55页 |
| 4.7.1 蛋白质结构域富集分析 | 第43-45页 |
| 4.7.2 KEGG代谢通路富集分析 | 第45-51页 |
| 4.7.2.1 补体和凝结系统 | 第46-47页 |
| 4.7.2.2 细胞外基质-受体相互作用 | 第47-51页 |
| 4.7.3 GO富集分析 | 第51-55页 |
| 第五章 结论与展望 | 第55-57页 |
| 5.1 实验结论 | 第55-56页 |
| 5.2 展望 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-63页 |
| 致谢 | 第63页 |
