| 致谢 | 第4-5页 |
| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6页 |
| 1.引言 | 第9-24页 |
| 1.1 DNA损伤修复与耐受 | 第9-11页 |
| 1.2 跨损伤DNA合成(Translesion Synthesis,TLS) | 第11-12页 |
| 1.3 TLS聚合酶 | 第12-19页 |
| 1.3.1 Y家族TLS聚合酶的基本特征 | 第13-18页 |
| 1.3.2 B家族DNA聚合酶 | 第18-19页 |
| 1.3.3 TLS聚合酶以相互合作的方式跨越损伤 | 第19页 |
| 1.4 TLS的调控机制 | 第19-22页 |
| 1.4.1 PCNA的单泛素化 | 第19-21页 |
| 1.4.2 SIVA1 | 第21-22页 |
| 1.5 本课题的研究目的与意义 | 第22-24页 |
| 2 实验材料与方法 | 第24-44页 |
| 2.1 PCNA和PCNA-GS_(linker)-SIVA1(40-96)蛋白的克隆、表达和纯化 | 第24-33页 |
| 2.1.1 PCNA基因的克隆和载体构建 | 第24-27页 |
| 2.1.2 PCNA-GS_(linker)-SIVA1(40-96)基因的克隆和载体构建 | 第27-33页 |
| 2.2 体外单泛素化实验 | 第33-34页 |
| 2.3 蛋白质印记(Western Blot) | 第34-37页 |
| 2.4 蛋白结晶 | 第37-39页 |
| 2.4.1 结晶条件筛选 | 第38-39页 |
| 2.4.2 晶体优化 | 第39页 |
| 2.5 衍射数据的收集和处理 | 第39-40页 |
| 2.5.1 晶体筛选和数据收集 | 第39-40页 |
| 2.5.2 数据处理 | 第40页 |
| 2.6 结构解析 | 第40-41页 |
| 2.7 等温量热滴定法(Isothermal Titration Calorimetry,ITC) | 第41-44页 |
| 2.7.1 技术原理 | 第42-44页 |
| 3 实验结果与分析 | 第44-59页 |
| 3.1 PCNA和PCNA-GS_(linker)-SIVA1(40-96)蛋白的纯化 | 第44-48页 |
| 3.1.1 PCNA蛋白的纯化 | 第44-46页 |
| 3.1.2 PCNA-GS_(linker)-SIVA1(40-96)蛋白的纯化 | 第46-48页 |
| 3.2 体外泛素化实验 | 第48-49页 |
| 3.3 蛋白结晶 | 第49-51页 |
| 3.3.1 结晶条件筛选 | 第49-50页 |
| 3.3.2 晶体优化 | 第50-51页 |
| 3.4 数据的收集和处理 | 第51-52页 |
| 3.4.1 晶体筛选和数据收集 | 第51-52页 |
| 3.4.2 数据处理 | 第52页 |
| 3.5 结构解析 | 第52-54页 |
| 3.6 PCNA-SIVA1(80-96)蛋白复合物的结构分析 | 第54-57页 |
| 3.7 PCNA蛋白与SIVA1(73-100)多肽滴定的ITC结果 | 第57-59页 |
| 4 讨论 | 第59-62页 |
| 参考文献 | 第62-72页 |
| 个人简历及攻读学位期间发表的论文 | 第72页 |
| 攻读学位期间发表的论文 | 第72页 |
