| 摘要 | 第6-8页 |
| ABSTRACT | 第8-9页 |
| 第1章 前言 | 第10-21页 |
| 1.1 肠道病毒71型和诺如病毒 | 第10-17页 |
| 1.1.1 肠道病毒71型简介 | 第10-14页 |
| 1.1.2 诺如病毒简介 | 第14-17页 |
| 1.2 EV71中和表位和诺如病毒P颗粒 | 第17-19页 |
| 1.2.1 EV71中和表位 | 第17页 |
| 1.2.2 诺如病毒P颗粒 | 第17-19页 |
| 1.3 嵌合疫苗简介 | 第19-20页 |
| 1.4 本文的研究内容和研究意义 | 第20-21页 |
| 1.4.1 研究内容 | 第20页 |
| 1.4.2 研究意义 | 第20-21页 |
| 第2章 嵌合蛋白重组质粒的构建 | 第21-37页 |
| 2.1 引言 | 第21页 |
| 2.2 实验材料 | 第21-25页 |
| 2.2.1 质粒和感受态细胞 | 第21-22页 |
| 2.2.2 试剂和试剂盒 | 第22-23页 |
| 2.2.3 实验仪器 | 第23-24页 |
| 2.2.4 合成的引物、寡核苷酸和基因 | 第24-25页 |
| 2.3 实验方法 | 第25-33页 |
| 2.3.1 质粒P42的获取 | 第25-26页 |
| 2.3.2 双酶切质粒P42 | 第26-27页 |
| 2.3.3 目的基因的获取 | 第27-29页 |
| 2.3.4 目的基因的重组 | 第29-30页 |
| 2.3.5 转化(DH5α) | 第30-31页 |
| 2.3.6 重组质粒的获取 | 第31-32页 |
| 2.3.7 重组质粒的鉴定 | 第32页 |
| 2.3.8 嵌合蛋白的空间结构预测 | 第32-33页 |
| 2.4 实验结果 | 第33-36页 |
| 2.4.1 含P结构域载体质粒P42的鉴定 | 第33页 |
| 2.4.2 酶切获取EV71的中和表位基因片段 | 第33-34页 |
| 2.4.3 PCR扩增EV71的中和表位基因片段 | 第34页 |
| 2.4.4 重组质粒测序验证 | 第34-36页 |
| 2.4.5 嵌合蛋白的空间结构预测 | 第36页 |
| 2.5 本章小结 | 第36-37页 |
| 第3章 嵌合蛋白的表达和纯化 | 第37-59页 |
| 3.1 引言 | 第37页 |
| 3.2 实验材料 | 第37-41页 |
| 3.2.1 质粒和感受态细胞 | 第37-38页 |
| 3.2.2 实验试剂和试剂盒 | 第38-39页 |
| 3.2.3 实验仪器 | 第39-41页 |
| 3.3 实验方法 | 第41-52页 |
| 3.3.1 转化(BL21(DE3) | 第41-42页 |
| 3.3.2 蛋白表达 | 第42-44页 |
| 3.3.3 破碎菌体 | 第44-45页 |
| 3.3.4 BeaverBeads~(TM) GSH磁珠纯化蛋白 | 第45-47页 |
| 3.3.5 Western blot分析 | 第47-48页 |
| 3.3.6 GSTrap~(TM) FF (5mL)柱纯化蛋白 | 第48-49页 |
| 3.3.7 目的蛋白溶液的超滤 | 第49-50页 |
| 3.3.8 GST标签的除去 | 第50-51页 |
| 3.3.9 目的蛋白性质的初步鉴定 | 第51-52页 |
| 3.4 实验结果 | 第52-58页 |
| 3.4.1 目的蛋白的诱导表达 | 第52-53页 |
| 3.4.2 表达目的蛋白的可溶性分析 | 第53页 |
| 3.4.3 磁珠纯化目的蛋白 | 第53-54页 |
| 3.4.4 目的蛋白的免疫印迹分析 | 第54-55页 |
| 3.4.5 P结构域蛋白的纯化 | 第55-56页 |
| 3.4.6 Pm+SP55-70-28嵌合蛋白的纯化 | 第56-58页 |
| 3.5 本章小结 | 第58-59页 |
| 第4章 嵌合蛋白的免疫原性评价 | 第59-70页 |
| 4.1 引言 | 第59页 |
| 4.2 实验材料 | 第59-61页 |
| 4.2.1 小鼠 | 第59页 |
| 4.2.2 细胞和病毒 | 第59页 |
| 4.2.3 实验试剂 | 第59-60页 |
| 4.2.4 实验仪器 | 第60-61页 |
| 4.3 实验方法 | 第61-66页 |
| 4.3.1 小鼠免疫 | 第61-62页 |
| 4.3.2 ELISA分析 | 第62-63页 |
| 4.3.3 Western blot分析 | 第63-64页 |
| 4.3.4 中和试验 | 第64-66页 |
| 4.4 实验结果 | 第66-69页 |
| 4.4.1 免疫后血清的抗体滴度 | 第66-68页 |
| 4.4.2 各表位嵌合蛋白的免疫印迹分析 | 第68页 |
| 4.4.3 中和试验 | 第68-69页 |
| 4.5 本章小节 | 第69-70页 |
| 第5章 讨论和结论 | 第70-72页 |
| 5.1 讨论 | 第70-71页 |
| 5.2 结论 | 第71-72页 |
| 参考文献 | 第72-77页 |
| 附录一 英文缩略词表 | 第77-78页 |
| 附录二 主要溶液配制 | 第78-82页 |
| 个人简介 | 第82页 |
| 在读期间参与发表的学术论文 | 第82-83页 |
| 在读期间参与申请的发明专利 | 第83-84页 |
| 致谢 | 第84-85页 |
