| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4页 |
| 第一章 绪论 | 第7-17页 |
| 1.1 干扰素的概述 | 第7页 |
| 1.2 h IL-29的结构 | 第7-8页 |
| 1.2.1 IL-29的基因结构 | 第7-8页 |
| 1.2.2 h IL-29的蛋白质结构 | 第8页 |
| 1.3 h IL-29的表达 | 第8-9页 |
| 1.4 h IL-29的受体及其信号转导通路 | 第9-10页 |
| 1.4.1 h IL-29受体组成 | 第9页 |
| 1.4.2 h IL-29受体的表达 | 第9页 |
| 1.4.3 h IL-29的信号转导通路 | 第9-10页 |
| 1.5 h IL-29的生物学效应 | 第10-13页 |
| 1.5.1 h IL-29的抗病毒活性 | 第11-12页 |
| 1.5.2 h IL-29的免疫调节活性 | 第12页 |
| 1.5.3 IL-29的抗增殖活性 | 第12页 |
| 1.5.4 h IL-29的抗肿瘤活性 | 第12-13页 |
| 1.6 h IL-29的临床应用及国内研究进展 | 第13-14页 |
| 1.6.1 h IL-29的临床应用 | 第13页 |
| 1.6.2 h IL-29的国内研究进展 | 第13-14页 |
| 1.7 立题意义和主要内容 | 第14-17页 |
| 1.7.1 立题意义 | 第14-15页 |
| 1.7.2 主要内容 | 第15-17页 |
| 第二章 材料与方法 | 第17-34页 |
| 2.1 实验材料 | 第17-19页 |
| 2.1.1 菌株、质粒和重组蛋白质 | 第17页 |
| 2.1.2 实验细胞株 | 第17页 |
| 2.1.3 主要试剂及耗材 | 第17-18页 |
| 2.1.4 培养基 | 第18页 |
| 2.1.5 主要仪器 | 第18-19页 |
| 2.1.6 常用试剂的配制 | 第19页 |
| 2.2 实验方法 | 第19-34页 |
| 2.2.1 h IL-29突变位点的确定 | 第19页 |
| 2.2.2 PCR引物设计及合成 | 第19-20页 |
| 2.2.3 h IL-29变异体cDNA的克隆 | 第20-21页 |
| 2.2.4 重组克隆质粒pUCm-T-hIL-29K43L和pUCm-T-hIL-29A143P的构建 | 第21-24页 |
| 2.2.5 重组表达质粒pPIC9KM-hIL-29K43L和pPIC9KM-hIL-29A143P的构建 | 第24-26页 |
| 2.2.6 重组表达质粒转化毕赤酵母及高拷贝重组菌株的筛选鉴定 | 第26-27页 |
| 2.2.7 重组菌株的诱导表达及高产菌株的筛选 | 第27-29页 |
| 2.2.8 重组蛋白质rh IL-29K43L、rhIL-29A143P的分离纯化与鉴定 | 第29-31页 |
| 2.2.9 抗肿瘤细胞增殖活性分析 | 第31-34页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第34-48页 |
| 3.1 h IL-29突变位点的确定 | 第34页 |
| 3.2 h IL-29变异体cDNA的克隆 | 第34-35页 |
| 3.3 重组克隆质粒pUCm-T-hIL-29K43L和pUCm-T-hIL-29A143P的构建及鉴定 | 第35-36页 |
| 3.3.1 pUCm-T-hIL-29K43L和pUCm-T-hIL-29A143P的菌液PCR鉴定 | 第35-36页 |
| 3.3.2 pUCm-T-hIL-29K43L和pUCm-T-hIL-29A143P的双酶切鉴定 | 第36页 |
| 3.4 重组表达质粒pPIC9KM-hIL-29K43L和pPIC9KM-hIL-29A143P的构建及鉴定 | 第36-37页 |
| 3.5 重组质粒转化毕赤酵母及高拷贝重组菌株的筛选鉴定 | 第37-38页 |
| 3.6 重组菌株的诱导表达及高产菌株的筛选 | 第38-39页 |
| 3.6.1 重组菌株的诱导表达 | 第38页 |
| 3.6.2 SDS-PAGE鉴定表达产物及高产菌株筛选 | 第38-39页 |
| 3.6.3 Western-Blotting鉴定重组蛋白质rhIL-29K43L、rhIL-29A143P | 第39页 |
| 3.7 重组蛋白质rhIL-29K43L、rhIL-29A143P分离纯化与鉴定 | 第39-42页 |
| 3.7.1 重组蛋白质rh IL-29K43L、rhIL-29A143P分离纯化 | 第39-40页 |
| 3.7.2 SDS-PAGE分析鉴定 | 第40-41页 |
| 3.7.3 Western-Blotting分析鉴定 | 第41-42页 |
| 3.7.4 高效液相色谱色谱（HPLC）纯度鉴定 | 第42页 |
| 3.8 抗肿瘤细胞增殖活性分析 | 第42-48页 |
| 3.8.1 抗人胃癌SGC7901细胞的增殖活性分析 | 第42-43页 |
| 3.8.2 抗人结肠癌HCT8细胞的增殖活性分析 | 第43-44页 |
| 3.8.3 抗人肝癌BEL7402细胞的增殖活性分析 | 第44-45页 |
| 3.8.4 抗人肺腺癌A549细胞的增殖活性分析 | 第45-46页 |
| 3.8.5 抗人急性单核白血病THP1细胞增殖分活性分析 | 第46-48页 |
| 主要结论与展望 | 第48-50页 |
| 主要结论 | 第48页 |
| 展望 | 第48-50页 |
| 致谢 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-56页 |
| 附录: 作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第56页 |
