| 中文摘要 | 第10-12页 |
| Abstract | 第12-13页 |
| 第一章 丙酮酸羧化酶 | 第14-22页 |
| 1.1 丙酮酸羧化酶的发现与分布 | 第14页 |
| 1.2 PC的生物学功能 | 第14-18页 |
| 1.2.1 PC在糖质异生中的作用 | 第14-15页 |
| 1.2.2 PC在脂肪生成中的作用 | 第15-16页 |
| 1.2.3 PC在胰岛细胞中的作用 | 第16-18页 |
| 1.2.4 丙酮酸羧化在星形胶质细胞中的作用 | 第18页 |
| 1.2.5 丙酮酸羧化在哺乳动物细胞系中的作用 | 第18页 |
| 1.3 PC的结构 | 第18-20页 |
| 1.4 PC缺陷的研究 | 第20-22页 |
| 第二章 干扰素 | 第22-31页 |
| 2.1 干扰素系统 | 第22页 |
| 2.2 Ⅰ型干扰素产生途径 | 第22-31页 |
| 2.2.1 TLRs诱导途径 | 第22-24页 |
| 2.2.2 RLRs途径 | 第24-31页 |
| 第三章 RNA病毒 | 第31-36页 |
| 3.1 流感病毒 | 第31-34页 |
| 3.1.1 IAV的感染和复制 | 第32-33页 |
| 3.1.2 流感病毒在中国的流行病学和过去的爆发 | 第33-34页 |
| 3.2 水泡性口炎病毒(VSV) | 第34-35页 |
| 3.3 肠道病毒71型(EV71) | 第35-36页 |
| 第四章 丙酮酸羧化酶(PC)对病毒诱导的干扰素应答的研究 | 第36-53页 |
| 4.1 实验材料 | 第36-38页 |
| 4.1.1 质粒 | 第36-37页 |
| 4.1.2 所用试剂 | 第37页 |
| 4.1.3 细胞及病毒 | 第37页 |
| 4.1.4 常用耗材及仪器 | 第37-38页 |
| 4.2 实验方法 | 第38-44页 |
| 4.2.1 质粒构建 | 第38页 |
| 4.2.2 质粒提取 | 第38页 |
| 4.2.3 贴壁细胞的复苏培养(以T25瓶为例) | 第38-39页 |
| 4.2.4 贴壁细胞的传代与冻存(以T25瓶为例) | 第39页 |
| 4.2.5 贴壁细胞转染 | 第39-40页 |
| 4.2.6 Reporter Assay实验步骤(以24孔板为例) | 第40页 |
| 4.2.7 RNA提取及逆转录的实验步骤 | 第40页 |
| 4.2.8 荧光定量PCR | 第40-41页 |
| 4.2.9 免疫印迹(Western blot) | 第41-42页 |
| 4.2.10 稳定敲减细胞系的构建 | 第42-44页 |
| 4.2.11 MTS实验 | 第44页 |
| 4.3 实验结果 | 第44-51页 |
| 4.3.1 过表达丙酮酸羧化酶(PC)对干扰素的调控影响 | 第44-47页 |
| 4.3.2 PC对干扰素的调控的必要性研究 | 第47-51页 |
| 4.4 讨论 | 第51-53页 |
| 第五章 丙酮酸羧化酶对病毒诱导的炎症因子应答的影响研究 | 第53-62页 |
| 5.1 实验材料 | 第53-54页 |
| 5.1.1 质粒 | 第53-54页 |
| 5.1.2 所用试剂 | 第54页 |
| 5.1.3 细胞及病毒 | 第54页 |
| 5.2 实验方法 | 第54-56页 |
| 5.2.1 贴壁细胞的复苏与培养 | 第54页 |
| 5.2.2 贴壁细胞的传代与冻存 | 第54页 |
| 5.2.3 贴壁细胞转染 | 第54页 |
| 5.2.4 Reporter Assay实验步骤 | 第54页 |
| 5.2.5 RNA提取及逆转录的实验步骤 | 第54-55页 |
| 5.2.6 荧光定量PCR | 第55页 |
| 5.2.7 PAA抑制PC酶活使用步骤 | 第55页 |
| 5.2.8 PC酶活性的测定步骤 | 第55-56页 |
| 5.3 实验结果 | 第56-60页 |
| 5.3.1 PC促进炎症因子的启动子的表达 | 第56-57页 |
| 5.3.2 PC促进内源性炎症因子的表达 | 第57页 |
| 5.3.3 内源性炎症因子的表达是需要PC的功能的 | 第57-58页 |
| 5.3.4 在PC-KD细胞系中回复PC的表达后对炎症因子的影响 | 第58-59页 |
| 5.3.5 PC酶活性对于PC在炎症应答通路中的作用 | 第59-60页 |
| 5.4 讨论 | 第60-62页 |
| 第六章 PC正调控宿主的拮抗RNA病毒的免疫应答 | 第62-71页 |
| 6.1 实验材料 | 第62-63页 |
| 6.1.1 细胞和病毒 | 第62-63页 |
| 6.1.2 试剂及仪器 | 第63页 |
| 6.2 实验方法 | 第63-65页 |
| 6.2.1 贴壁细胞转染 | 第63页 |
| 6.2.2 流感病毒扩增及效价测定 | 第63-64页 |
| 6.2.3 流感病毒复制检测方法 | 第64-65页 |
| 6.2.4 标准噬斑实验步骤 | 第65页 |
| 6.3 实验结果 | 第65-70页 |
| 6.3.1 PC对于流感病毒复制的影响 | 第65-67页 |
| 6.3.2 PC对于肠道病毒(EV71)复制的影响 | 第67-68页 |
| 6.3.3 PC对于VSV病毒复制的影响 | 第68-69页 |
| 6.3.4 在Vero细胞中PC对于VSV病毒的复制没有影响 | 第69-70页 |
| 6.4 结果讨论 | 第70-71页 |
| 第七章 PC通过结合MAVS复合物激活RLR通路调控机体的免疫应答 | 第71-86页 |
| 7.1 实验材料 | 第72-73页 |
| 7.1.1 质粒 | 第72页 |
| 7.1.2 所用试剂 | 第72页 |
| 7.1.3 细胞及病毒 | 第72页 |
| 7.1.4 常用耗材及仪器 | 第72-73页 |
| 7.2 实验方法 | 第73-76页 |
| 7.2.1 质粒构建 | 第73页 |
| 7.2.2 CO-IP实验 | 第73-74页 |
| 7.2.3 线粒体分离 | 第74-75页 |
| 7.2.4 免疫荧光(IF) | 第75-76页 |
| 7.3 实验结果 | 第76-84页 |
| 7.3.1 PC通过MAVS调控病毒诱导的信号通路 | 第76-77页 |
| 7.3.2 PC 跟 MAVS的相互作用 | 第77页 |
| 7.3.3 PC 跟 MAVS的相关元件的相互作用 | 第77-79页 |
| 7.3.4 病毒刺激PC发生细胞质转位 | 第79-80页 |
| 7.3.5 PC跟 MAVS和TRAF6的内源性相互作用 | 第80-82页 |
| 7.3.6 PC与其截短跟MAVS和TRAF6的相互作用 | 第82-83页 |
| 7.3.7 PC与TRAF6和其截短的相互作用 | 第83-84页 |
| 7.4 结果讨论 | 第84-86页 |
| 第八章 PC正调控病毒诱导的NF-κB信号通路 | 第86-92页 |
| 8.1 实验材料 | 第86-87页 |
| 8.1.1 所用试剂 | 第86-87页 |
| 8.1.2 细胞及病毒 | 第87页 |
| 8.2 实验方法 | 第87-88页 |
| 8.2.1 蛋白磷酸化检测 | 第87页 |
| 8.2.2 细胞核抽提步骤 | 第87-88页 |
| 8.2.3 免疫荧光实验 | 第88页 |
| 8.3 实验结果 | 第88-90页 |
| 8.3.1 PC促进了IKK和IκBα的磷酸化作用 | 第88-89页 |
| 8.3.2 PC正调控NF-κB的入核 | 第89-90页 |
| 8.4 讨论 | 第90-92页 |
| 第九章 研究总结 | 第92-94页 |
| 参考文献 | 第94-107页 |
| 研究生期间发表和待发表的论文 | 第107-108页 |
| 致谢 | 第108页 |
