| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-8页 |
| 1 前言 | 第8-18页 |
| ·生物催化 | 第8页 |
| ·生物催化概念 | 第8页 |
| ·生物催化的价值和意义 | 第8页 |
| ·羟醛缩合反应概述 | 第8-9页 |
| ·概念及反应机理 | 第8-9页 |
| ·羟醛缩合酶 | 第9页 |
| ·N-乙酰神经氨酸裂合酶 | 第9-14页 |
| ·唾液酸概述 | 第9-11页 |
| ·N-乙酰-D-神经氨酸简介 | 第11页 |
| ·N-乙酰-D-神经氨酸制备发展 | 第11-13页 |
| ·N-乙酰葡萄糖胺异构酶概述 | 第13-14页 |
| ·甘氨丙氨酸依赖型醛缩酶 | 第14-16页 |
| ·甘氨酸醛缩酶概念 | 第14页 |
| ·苏氨酸醛缩酶概述 | 第14-15页 |
| ·苏氨酸醛缩酶的研究现状 | 第15-16页 |
| ·本课题研究内容、目的和意义 | 第16-18页 |
| ·研究目的和意义 | 第16页 |
| ·研究内容 | 第16-18页 |
| 2 材料与方法 | 第18-28页 |
| ·材料 | 第18-19页 |
| ·菌株和质粒 | 第18页 |
| ·目的基因的获得 | 第18页 |
| ·试剂和工具酶 | 第18页 |
| ·主要设备 | 第18-19页 |
| ·方法 | 第19-28页 |
| ·序列分析 | 第19页 |
| ·工程菌的构建 | 第19-23页 |
| ·ShNAL的表达纯化及聚集状态分析 | 第23-24页 |
| ·活性的测定 | 第24页 |
| ·ShNAL的酶学性质分析 | 第24页 |
| ·ShNAL酶的稳定性研究和动力学参数测定 | 第24页 |
| ·BmNAL的相关研究 | 第24-25页 |
| ·N-乙酰葡萄糖胺异构酶的克隆和表达 | 第25-26页 |
| ·HPLC分析条件 | 第26页 |
| ·ShNAL合成产物Neu5Ac的分离和鉴定 | 第26页 |
| ·苏氨酸醛缩酶的工程菌构建、表达纯化及活性鉴定 | 第26-28页 |
| 3 结果与讨论 | 第28-54页 |
| ·序列分析 | 第28-31页 |
| ·ShNAL和BmNAL的序列分析 | 第28-30页 |
| ·苏氨酸醛缩酶序列比对结果分析 | 第30-31页 |
| ·N-乙酰神经氨酸裂合酶工程菌的构建表达及性质研究 | 第31-48页 |
| ·pET32a-shnal和pET32a-bmnal工程菌的构建 | 第31-32页 |
| ·pET32a-bmnal和pET32a-shnal试表达及可溶性鉴定 | 第32-33页 |
| ·pET28a-shnal和pET28a-bmnal工程菌的构建 | 第33-37页 |
| ·用酶标仪对N-乙酰神经氨酸活性的测定 | 第37-38页 |
| ·ShNAL的纯化及性质分析 | 第38-42页 |
| ·BmNAL的纯化以及纯酶活性的测定 | 第42-44页 |
| ·合成产物的分离和鉴定 | 第44-45页 |
| ·N-乙酰葡萄糖胺异构酶与ShNAL组合串联反应 | 第45-48页 |
| ·苏氨酸醛缩酶表达及活性鉴定 | 第48-54页 |
| ·苏氨酸醛缩酶DdTA和HpTA的表达 | 第48-49页 |
| ·苏氨酸醛缩酶DdTA和HpTA的活性鉴定 | 第49-51页 |
| ·新的pET28a-ddta表达载体的构建以及纯化后蛋白的活性鉴定 | 第51-54页 |
| 4 结论 | 第54-56页 |
| 5 展望 | 第56-58页 |
| 6 参考文献 | 第58-64页 |
| 7 论文发表情况 | 第64-66页 |
| 8 致谢 | 第66-68页 |
| 附录 | 第68-78页 |
