| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-9页 |
| 1 前言 | 第9-21页 |
| ·顺,顺-粘康酸的生物制造研究概述 | 第9-13页 |
| ·合成生物学及应用 | 第13-19页 |
| ·合成生物学定义 | 第13-14页 |
| ·合成生物学研究现状 | 第14-15页 |
| ·合成生物学应用 | 第15-19页 |
| ·本论文研究背景、内容及方法 | 第19-21页 |
| ·本论文研究背景 | 第19页 |
| ·本论文研究内容及方法 | 第19-21页 |
| 2 材料与方法 | 第21-44页 |
| ·菌种和质粒 | 第21-29页 |
| ·培养基 | 第29页 |
| ·种子培养基 | 第29页 |
| ·M9基本培养基 | 第29页 |
| ·基本发酵培养基 | 第29页 |
| ·菌株培养条件及菌种保藏 | 第29页 |
| ·实验药品及试剂的配制 | 第29-32页 |
| ·实验药品及试剂 | 第29-31页 |
| ·实验试剂的配制 | 第31-32页 |
| ·实验仪器及设备 | 第32-33页 |
| ·分子克隆实验 | 第33-40页 |
| ·BIOMAGE试剂盒提取质粒 | 第33页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第33-34页 |
| ·外源DNA片段的PCR扩增 | 第34-36页 |
| ·酶切 | 第36-37页 |
| ·DNA磷酸化 | 第37页 |
| ·纯化 | 第37页 |
| ·胶回收 | 第37-38页 |
| ·连接 | 第38页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第38-39页 |
| ·转化 | 第39-40页 |
| ·转化子的验证 | 第40页 |
| ·退火 | 第40页 |
| ·单位OD_(600)相对红色荧光强度的测定 | 第40-41页 |
| ·儿茶酚1,2-双氧化酶比活力的测定 | 第41-42页 |
| ·BugBuster蛋白抽提试剂盒抽提蛋白 | 第41页 |
| ·BCA法测定蛋白质含量 | 第41-42页 |
| ·儿茶酚1,2-双氧化酶活力测定 | 第42页 |
| ·发酵液中顺,顺-粘康酸含量的测定 | 第42-44页 |
| ·发酵液中的顺,顺-粘康酸的检测方法 | 第42-44页 |
| 3 结果与讨论 | 第44-65页 |
| ·合成启动子构建及优化调控 | 第44-51页 |
| ·合成启动子的构建及筛选 | 第44-47页 |
| ·合成启动子序列测定及分析 | 第47-49页 |
| ·合成启动子的应用 | 第49-50页 |
| ·讨论 | 第50-51页 |
| ·合成启动子介导三基因aroZ、aroY及catA组合表达调控 | 第51-55页 |
| ·启动子组合克隆构建 | 第51-53页 |
| ·启动子组合菌株的发酵 | 第53-54页 |
| ·讨论 | 第54-55页 |
| ·儿茶酚1,2-双氧化酶理性设计及代谢优化 | 第55-60页 |
| ·突变位点的确定 | 第55-57页 |
| ·突变体的获得 | 第57页 |
| ·突变体的应用 | 第57-59页 |
| ·讨论 | 第59-60页 |
| ·蛋白骨架介导的代谢调控 | 第60-65页 |
| ·蛋白骨架的作用 | 第60页 |
| ·蛋白骨架的构建及应用 | 第60-64页 |
| ·讨论 | 第64-65页 |
| 4 结论 | 第65-66页 |
| 5 展望 | 第66-67页 |
| 6 参考文献 | 第67-75页 |
| 7 攻读硕士学位期间发表论文情况 | 第75-76页 |
| 8 致谢 | 第76页 |