| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-9页 |
| 目录 | 第9-13页 |
| 第一篇 引发体蛋白DnaT结构生物学和功能基础研究 | 第13-110页 |
| 第一章 综述 | 第13-32页 |
| ·大肠杆菌引发体的研究进展 | 第13-22页 |
| ·大肠杆菌复制体的组成 | 第13-14页 |
| ·大肠杆菌引发体组成及分类 | 第14-16页 |
| ·大肠杆菌PriA依赖的引发体组成及功能 | 第16-19页 |
| ·PriA依赖的引发体组装的分子机制 | 第19-21页 |
| ·PriA依赖的引发体各组分蛋白的结构学研究进展 | 第21-22页 |
| ·DnaT蛋白功能的相关研究进展 | 第22页 |
| ·ssDNA结合结构域的结构生物研究进展概述 | 第22-31页 |
| ·ssDNA结合结构域概述 | 第22-23页 |
| ·OB fold结构域 | 第23-24页 |
| ·KH domain结构域 | 第24-25页 |
| ·RRM结构域 | 第25页 |
| ·Whirly fold结构域 | 第25-27页 |
| ·RecA-like fold结构域 | 第27-30页 |
| ·DprA fold结构域 | 第30-31页 |
| ·本篇拟解决的问题 | 第31-32页 |
| 第二章 DnaT的结构生物学和功能基础研究 | 第32-102页 |
| ·实验材料与方法 | 第32-42页 |
| ·基因克隆及表达质粒构建 | 第32-35页 |
| ·目的基因克隆 | 第32-33页 |
| ·目的基因片段鉴定胶回收,双酶切及连接载体 | 第33-34页 |
| ·感受态细胞制备 | 第34页 |
| ·连接产物转化 | 第34页 |
| ·菌液PCR鉴定 | 第34-35页 |
| ·突变体质粒构建 | 第35页 |
| ·重组蛋白表达与纯化 | 第35-37页 |
| ·重组蛋白表达 | 第35-36页 |
| ·重组蛋白纯化 | 第36-37页 |
| ·蛋白晶体生长 | 第37页 |
| ·晶体数据收集与数据处理 | 第37-38页 |
| ·DnaT~(84-153)-dT15复合物的结构解析 | 第38页 |
| ·荧光偏振实验 | 第38-39页 |
| ·聚丙烯酰胺凝胶阻滞迁移实验 | 第39-40页 |
| ·琼脂糖凝胶阻滞迁移实验 | 第40-41页 |
| ·电镜负染实验 | 第41页 |
| ·圆二色谱分析实验 | 第41-42页 |
| ·分子排阻层析实验 | 第42页 |
| ·实验结果 | 第42-102页 |
| ·DnaT蛋白表达纯化与结晶 | 第42-45页 |
| ·DnaT~(84-153)-dT15复合物结构解析及模型质量评估 | 第45-58页 |
| ·DnaT~(84-153)-dT15复合物中ssDNA结构分析与对比 | 第58-67页 |
| ·复合物结晶过程中DnaT蛋白发生降解 | 第67-69页 |
| ·DnaT~(84-153)-dT15复合物中蛋白质结构分析与对比 | 第69-77页 |
| ·DnaT~(84-153)-dT15复合物整体结构分析 | 第77-79页 |
| ·DnaT~(84-153)与ssDNA相互作用的模式 | 第79-84页 |
| ·DnaT中参与ssDNA相互作用的关键氨基酸残基 | 第84-86页 |
| ·DnaT蛋白的N端和C端对于协同性结合ssDNA发挥着重要作用 | 第86-88页 |
| ·DnaT蛋白可以结合phiX-174 ssDNA形成核蛋白纤维 | 第88-94页 |
| ·DnaT~(84-153)-dT15复合物晶体结构揭示了一种新颖的ssDNA结合模式 | 第94-97页 |
| ·DnaT-ssDNA核蛋白纤维可能发挥脚手架作用从而为后续引发体的组装奠定基础 | 第97-99页 |
| ·DnaT和PriB相互作用的初步研究 | 第99-102页 |
| 本篇小结 | 第102-103页 |
| 参考文献 | 第103-110页 |
| 第二篇 附录 | 第110-151页 |
| 第一章 综述 | 第112-127页 |
| ·端粒研究的概况 | 第112-117页 |
| ·端粒及其组成 | 第112-115页 |
| ·端粒酶及端粒稳态的维持 | 第115-117页 |
| ·hCST复合物的研究进展 | 第117-126页 |
| ·hCST复合物的发现 | 第117-120页 |
| ·hCST复合物与端粒稳态 | 第120-122页 |
| ·hCST复合物与端粒复制 | 第122-125页 |
| ·hCST复合物与停滞的复制叉重启 | 第125-126页 |
| ·本篇拟解决的问题 | 第126-127页 |
| 第二章 hCST复合物的结构生物学基础研究 | 第127-142页 |
| ·实验材料与方法 | 第127-133页 |
| ·基因克隆及表达质粒构建 | 第127-131页 |
| ·目的基因克隆 | 第127-129页 |
| ·目的基因片段鉴定胶回收,双酶切及连接载体 | 第129-130页 |
| ·感受态细胞制备 | 第130页 |
| ·连接产物转化 | 第130页 |
| ·菌液PCR鉴定 | 第130-131页 |
| ·重组蛋白表达与纯化 | 第131-133页 |
| ·重组蛋白表达 | 第131页 |
| ·重组蛋白纯化 | 第131-132页 |
| ·TEV酶和ULP酶纯化 | 第132-133页 |
| ·蛋白晶体生长 | 第133页 |
| ·实验结果 | 第133-142页 |
| ·Ten1蛋白克隆,表达纯化与结晶 | 第133-135页 |
| ·Stn1蛋白克隆与表达纯化 | 第135-138页 |
| ·Stn1-Ten1蛋白复合物的表达纯化与结晶 | 第138-142页 |
| 本篇小结 | 第142-143页 |
| 参考文献 | 第143-151页 |
| 致谢 | 第151-153页 |
| 在读期间发表的学术论文与取得的研究成果 | 第153页 |
