| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 目录 | 第8-12页 |
| 第一章 硫氰酸酶的结构和功能简介 | 第12-24页 |
| ·前言 | 第12-13页 |
| ·硫氰酸酶的催化机制 | 第13-14页 |
| ·硫氰酸酶同源结构域 | 第14-15页 |
| ·硫氰酸酶的分类 | 第15-17页 |
| ·串联结构域蛋白 | 第15页 |
| ·单一结构域蛋白 | 第15-16页 |
| ·复合结构域蛋白 | 第16-17页 |
| ·长活性位点蛋白 | 第17页 |
| ·硫氰酸酶的生物学功能 | 第17-22页 |
| ·氰化物解毒作用 | 第18-19页 |
| ·硫胺和硫脲苷的合成 | 第19-20页 |
| ·钼蛋白辅助因子的合成 | 第20-21页 |
| ·含硒生物大分子的合成 | 第21页 |
| ·调控细胞周期 | 第21-22页 |
| ·硫氰酸酶的其他功能 | 第22页 |
| ·硫氰酸酶超家族研究的展望 | 第22-24页 |
| 第二章 电子顺磁共振基本理论及在蛋白质研究中的应用 | 第24-44页 |
| ·前言 | 第24页 |
| ·电子顺磁共振基本原理及谱仪简介 | 第24-27页 |
| ·电子顺磁共振基本原理 | 第24-25页 |
| ·电子顺磁共振谱仪 | 第25-26页 |
| ·信号收集时仪器参数 | 第26-27页 |
| ·自旋标记技术 | 第27-29页 |
| ·自旋标记物 | 第27-28页 |
| ·位点特异性自旋标记(SDSL) | 第28-29页 |
| ·从SDSL-EPR得到的主要信息 | 第29-35页 |
| ·动力学信息(motion) | 第30-32页 |
| ·溶剂易趋性(Accessibilty) | 第32-33页 |
| ·距离信息 | 第33-35页 |
| ·SDSL-EPR在蛋白质研究中的应用 | 第35-41页 |
| ·通过动力学和易趋性信息确定蛋白质二级结构 | 第35-37页 |
| ·蛋白的入膜深度 | 第37-38页 |
| ·检测蛋白质的构象变化 | 第38-41页 |
| ·在生物学其他方面的应用 | 第41-42页 |
| ·小结 | 第42-44页 |
| 第三章 大肠杆菌YgaP的硫氰酸酶结构域的结构及功能研究 | 第44-72页 |
| ·前言 | 第44-46页 |
| ·实验材料与方法 | 第46-60页 |
| ·引物设计 | 第46-47页 |
| ·PCR反应 | 第47-48页 |
| ·PCR产物的鉴定和回收 | 第48页 |
| ·双酶切反应 | 第48-49页 |
| ·连接反应 | 第49-50页 |
| ·连接产物的转化 | 第50页 |
| ·菌落PCR和双酶切鉴定 | 第50-51页 |
| ·蛋白表达条件的筛选 | 第51-52页 |
| ·YgaP(1-107)的表达 | 第52页 |
| ·YgaP(1-107)蛋白纯化及核磁样品的制备 | 第52-53页 |
| ·核磁实验 | 第53页 |
| ·主链归属 | 第53-56页 |
| ·侧链原子的化学位移归属 | 第56-58页 |
| ·二级结构预测及二面角约 | 第58页 |
| ·距离约束信息 | 第58-59页 |
| ·Na_2S_2O_3和NaSCN滴定 | 第59-60页 |
| ·实验结果与讨论 | 第60-69页 |
| ·YgaP硫氰酸酶结构域的化学位移归属 | 第60-61页 |
| ·Talos+二级结构预测 | 第61-62页 |
| ·YgaP(1-107)的溶液结构 | 第62-66页 |
| ·硫氰酸酶结构域的结构比对 | 第66页 |
| ·Na_2S_2O_3和NaSCN滴定实验 | 第66-69页 |
| ·小结 | 第69-72页 |
| 第四章 利用电子顺磁共振技术解析YgaP跨膜区拓扑模型 | 第72-96页 |
| ·引言 | 第72-73页 |
| ·实验材料和方法 | 第73-83页 |
| ·YgaP蛋白序列和二级结构预测 | 第73-74页 |
| ·位点突变 | 第74-75页 |
| ·YgaP的表达 | 第75页 |
| ·YgaP的融膜去污剂的筛选 | 第75-76页 |
| ·蛋白纯化及洗脱去污剂的筛选 | 第76页 |
| ·用分子筛纯化蛋白 | 第76-77页 |
| ·突变位点的MTSL标记 | 第77页 |
| ·圆二色谱实验 | 第77-78页 |
| ·连续波EPR实验 | 第78页 |
| ·功率饱和EPR实验 | 第78-79页 |
| ·DEER光谱收集 | 第79-80页 |
| ·CW-EPR及DEER的光谱处理及距离拟合 | 第80-82页 |
| ·距离数据处理 | 第82页 |
| ·YgaP刚性结构模型的搭建 | 第82-83页 |
| ·实验结果与讨论 | 第83-93页 |
| ·YgaP的表达纯化 | 第83-85页 |
| ·YgaP跨膜区的动力学特性 | 第85-87页 |
| ·YgaP跨膜区的易趋性特征 | 第87-89页 |
| ·YgaP跨膜区的距离信息及结构模型建立 | 第89-93页 |
| ·小结 | 第93-96页 |
| 参考文献 | 第96-106页 |
| 附录 | 第106-110页 |
| 致谢 | 第110-111页 |
| 在读期间发表的学术论文与取得的研究成果 | 第111页 |
