| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-16页 |
| 第一章 绪论 | 第16-33页 |
| 1 菊粉酶研究进展 | 第16-26页 |
| ·菊粉 | 第16-17页 |
| ·菊粉酶 | 第17-18页 |
| ·菊粉酶的微生物来源 | 第18-22页 |
| ·菊粉酶基因的异源表达 | 第22-24页 |
| ·菊粉酶的应用 | 第24-26页 |
| 2 蔗糖酶研究进展 | 第26-28页 |
| ·蔗糖与蔗糖酶 | 第26页 |
| ·蔗糖酶的微生物来源 | 第26-27页 |
| ·酒精酵母蔗糖酶 | 第27-28页 |
| ·蔗糖酶的应用 | 第28页 |
| 3 燃料酒精的研究概述 | 第28-31页 |
| ·生物质原料 | 第28-29页 |
| ·生产酒精的微生物 | 第29页 |
| ·利用菊芋生产酒精的现状 | 第29-31页 |
| 4 论文的研究依据和主要的研究内容 | 第31-33页 |
| 第二章 菊粉内切酶基因在解脂亚罗维亚酵母中的表达及重组酶性质的研究 | 第33-65页 |
| 0 前言 | 第33-34页 |
| 1 实验材料 | 第34-37页 |
| ·菌株与质粒 | 第34页 |
| ·培养基 | 第34-35页 |
| ·试剂 | 第35-37页 |
| 2 方法 | 第37-48页 |
| ·表达载体的构建 | 第37-41页 |
| ·转化 Y. lipolytica Po1h | 第41-43页 |
| ·阳性转化子的筛选及验证 | 第43-45页 |
| ·重组菊粉内切酶的纯化 | 第45-46页 |
| ·重组菊粉内切酶的性质研究 | 第46-47页 |
| ·重组酶水解产物的薄层层析分析 | 第47-48页 |
| ·菊粉内切、外切酶协同作用的分析 | 第48页 |
| 3 结果与讨论 | 第48-64页 |
| ·菊粉内切酶表达质粒的构建 | 第48-50页 |
| ·转化片段的获得及转化 | 第50-51页 |
| ·转化子的筛选和验证 | 第51-54页 |
| ·重组菊粉内切酶的纯化结果 | 第54-56页 |
| ·纯化的重组酶的 SDS-PAGE 分析 | 第56-57页 |
| ·重组菊粉内切酶性质的研究 | 第57-62页 |
| ·重组酶水解产物的薄层层析分析 | 第62-63页 |
| ·菊粉内切、外切酶协同作用的分析 | 第63-64页 |
| 4 本章小结 | 第64-65页 |
| 第三章 菊粉内切酶基因在酒精酵中的表达 | 第65-83页 |
| 0 前言 | 第65-67页 |
| 1 材料 | 第67-68页 |
| ·菌株与质粒 | 第67页 |
| ·培养基与试剂 | 第67-68页 |
| 2 方法 | 第68-74页 |
| ·酵母表达载体的构建 | 第68-72页 |
| ·转化 Saccharomyces sp. W12d | 第72页 |
| ·阳性转化子筛选及验证 | 第72-73页 |
| ·转化子产酶稳定性的测定 | 第73页 |
| ·酒精发酵种子液的制备 | 第73页 |
| ·利用转化子直接发酵菊粉产酒精 | 第73页 |
| ·还原糖和总糖的测定 | 第73-74页 |
| ·酒精含量的测定 | 第74页 |
| ·5 -L 发酵罐发酵生产酒精 | 第74页 |
| 3 结果与讨论 | 第74-82页 |
| ·酒精酵母表达载体的构建 | 第74-76页 |
| ·转化 Saccharomyces sp. W12d | 第76-77页 |
| ·转化子的筛选和验证 | 第77-79页 |
| ·转化子产酶稳定性的测定 | 第79-80页 |
| ·150 mL 体系同步糖化菊粉生产酒精 | 第80-81页 |
| ·5-L 发酵罐同步糖化菊粉生产酒精 | 第81-82页 |
| 4 本章小结 | 第82-83页 |
| 第四章 转化子 D5 同步糖化生料菊芋粉生产酒精 | 第83-93页 |
| 0 前言 | 第83页 |
| 1 材料 | 第83-84页 |
| ·菌株 | 第83-84页 |
| ·培养基与试剂 | 第84页 |
| 2 方法 | 第84-86页 |
| ·酒精发酵种子液的制备 | 第84页 |
| ·酒精蒸馏和酒精含量的测定 | 第84页 |
| ·总糖、还原糖的测定 | 第84页 |
| ·原料预处理对发酵菊芋粉产酒精的影响 | 第84页 |
| ·料液比对发酵菊芋粉产酒精的影响 | 第84-85页 |
| ·初始 pH 值对发酵菊芋粉产酒精的影响 | 第85页 |
| ·接种量对发酵菊芋粉产酒精的影响 | 第85页 |
| ·氮源对发酵菊芋粉产酒精的影响 | 第85页 |
| ·麦芽浸粉浓度对发酵菊芋粉产酒精的影响 | 第85-86页 |
| ·1.0 L 发酵体系酒精发酵 | 第86页 |
| 3 结果与讨论 | 第86-92页 |
| ·原料预处理对酒精发酵的影响 | 第86-87页 |
| ·料液比对酒精发酵的影响 | 第87-88页 |
| ·接种量对酒精发酵的影响 | 第88-89页 |
| ·初始 pH 值对酒精发酵影响 | 第89页 |
| ·氮源对发酵菊芋粉产酒精的影响 | 第89-90页 |
| ·麦芽浸粉浓度对发酵菊芋粉产酒精的影响 | 第90-91页 |
| ·1.0 L 发酵体系发酵酒精 | 第91-92页 |
| 4 本章小结 | 第92-93页 |
| 第五章 蔗糖酶与酒精酵母分解菊粉之间关系的初探 | 第93-112页 |
| 0 前言 | 第93-95页 |
| 1 材料 | 第95-96页 |
| ·菌株和质粒 | 第95-96页 |
| ·培养基 | 第96页 |
| ·试剂 | 第96页 |
| 2 方法 | 第96-102页 |
| ·敲除载体的构建 | 第97-99页 |
| ·酵母的转化 | 第99页 |
| ·敲除转化子的初步筛选 | 第99页 |
| ·敲除纯合子的获取 | 第99-100页 |
| ·敲除纯合子的验证 | 第100-102页 |
| 3 结果和讨论 | 第102-110页 |
| ·SUC2 基因敲除载体的构建 | 第102-104页 |
| ·酵母的电转化 | 第104页 |
| ·敲除转化子的初步验证 | 第104-107页 |
| ·敲除纯合体的获取 | 第107-108页 |
| ·敲除纯合体的验证 | 第108-110页 |
| 4 本章小结 | 第110-112页 |
| 第六章 SUC2 基因在酒精酵母中的超表达 | 第112-123页 |
| 0 前言 | 第112页 |
| 1 材料 | 第112-113页 |
| ·菌株与质粒 | 第112页 |
| ·培养基与试剂 | 第112-113页 |
| 2 方法 | 第113-116页 |
| ·引物的设计 | 第113页 |
| ·PCR 扩增蔗糖酶基因 | 第113-114页 |
| ·T-A 克隆、转化大肠杆菌、筛选阳性克隆 | 第114页 |
| ·酒精酵母超表达载体的构建 | 第114页 |
| ·转化 Saccharomyces sp. W4 | 第114-115页 |
| ·超表达转化子的筛选 | 第115页 |
| ·实时荧光定量 PCR 验证超表达 | 第115页 |
| ·重组酶水解产物的薄层层析分析 | 第115页 |
| ·转化子产酶稳定性的测定 | 第115页 |
| ·利用转化子直接发酵菊粉产酒精 | 第115页 |
| ·酒精蒸馏和酒精含量的测定 | 第115-116页 |
| ·还原糖和总糖的测定 | 第116页 |
| ·1.0 L 发酵体系酒精发酵 | 第116页 |
| 3 结果与讨论 | 第116-122页 |
| ·酒精酵母超表达载体的构建 | 第116-117页 |
| ·转化 Saccharomyces sp. W4 | 第117-118页 |
| ·超表达转化子的筛选 | 第118-119页 |
| ·实时荧光定量 PCR 验证超表达 | 第119-120页 |
| ·重组酶水解产物的薄层层析分析 | 第120页 |
| ·转化子产酶稳定性的测定 | 第120-121页 |
| ·150 mL 体系同步糖化菊粉生产酒精 | 第121-122页 |
| ·1.0 L 发酵体系酒精发酵 | 第122页 |
| 4 本章小结 | 第122-123页 |
| 总结与创新点 | 第123-125页 |
| 参考文献 | 第125-137页 |
| 致谢 | 第137-138页 |
| 个人简历及发表的学术论文 | 第138-140页 |
