| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-9页 |
| 缩略语表 | 第9-10页 |
| 1. 前言 | 第10-27页 |
| ·冰核蛋白研究背景 | 第10-15页 |
| ·冰核细菌与冰核蛋白简介 | 第10-11页 |
| ·冰核蛋白结构与功能 | 第11-13页 |
| ·冰晶核蛋白的应用 | 第13-15页 |
| ·转座子Tn5背景 | 第15-18页 |
| ·转座的概念 | 第15页 |
| ·转座的分类 | 第15页 |
| ·转座的遗传学效应 | 第15-16页 |
| ·Tn5转座子的介绍 | 第16页 |
| ·pUT mini-Tn5 Km2转座子 | 第16-17页 |
| ·转座子的应用 | 第17-18页 |
| ·转座子插入位点鉴定方法 | 第18-23页 |
| ·质粒拯救法 | 第19页 |
| ·反向PCR法 | 第19-20页 |
| ·接头法 | 第20页 |
| ·TAIL-PCR法 | 第20-22页 |
| ·改进的TAIL-PCR法 | 第22-23页 |
| ·柠檬酸合成酶 | 第23-25页 |
| ·三羧酸循环 | 第23-24页 |
| ·柠檬酸合成酶 | 第24-25页 |
| ·研究目的与意义 | 第25-27页 |
| 2. 材料与方法 | 第27-40页 |
| ·实验材料 | 第27-31页 |
| ·所用菌株与质粒 | 第27-28页 |
| ·培养基 | 第28页 |
| ·实验所需试剂 | 第28-30页 |
| ·实验所用仪器 | 第30-31页 |
| ·实验方法 | 第31-40页 |
| ·大肠杆菌质粒抽提 | 第31页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞制备 | 第31-32页 |
| ·丁香假单胞菌总DNA提取 | 第32页 |
| ·DNA体外重组与克隆构建 | 第32-33页 |
| ·突变文库构建 | 第33-34页 |
| ·丁香假单胞菌INP分泌诱导 | 第34页 |
| ·SDS-PAGE电泳 | 第34-35页 |
| ·Western Blot实验 | 第35-36页 |
| ·膜杂交实验 | 第36页 |
| ·流式细胞仪分析 | 第36页 |
| ·总RNA的提取 | 第36-37页 |
| ·RNA纯化及检测 | 第37页 |
| ·RNA的反转录 | 第37-38页 |
| ·Real Time PCR | 第38页 |
| ·实验流程示意图 | 第38-40页 |
| 3. 结果与分析 | 第40-52页 |
| ·转座子mini-Tn5转座突变文库的构建与冰核蛋白InaQ分泌活性增强或减弱突变株筛选 | 第40-42页 |
| ·丁香假单胞菌MB03菌株的mini-Tn5突变文库的构建 | 第40-41页 |
| ·从MB03突变文库中筛选效应菌株 | 第41-42页 |
| ·突变株中转座子插入位点的鉴定 | 第42-48页 |
| ·反向PCR | 第42-43页 |
| ·半随机的TAIL-PCR | 第43-45页 |
| ·插入位点序列的BLAST分析 | 第45-48页 |
| ·柠檬酸合成酶与INP分泌关系研究 | 第48-52页 |
| ·表达补偿载体和补偿菌株的构建 | 第48-50页 |
| ·INP表达的变化 | 第50-52页 |
| 4. 小结 | 第52-53页 |
| 5. 讨论 | 第53-57页 |
| ·转座突变文库的意义 | 第53页 |
| ·冰核蛋白的分泌机制研究 | 第53-54页 |
| ·对插入位点的研究 | 第54-55页 |
| ·柠檬酸合酶的作用 | 第55页 |
| ·展望 | 第55-57页 |
| 参考文献 | 第57-63页 |
| 致谢 | 第63页 |