| 摘要 | 第1-10页 |
| ABSTRACT | 第10-12页 |
| 缩略语表 | 第12-13页 |
| 1 前言 | 第13-32页 |
| ·苏云金芽胞杆菌 | 第13-20页 |
| ·苏云金芽胞杆菌的生物学特性 | 第13页 |
| ·苏云金芽胞杆菌杀虫活性成分 | 第13-14页 |
| ·苏云金芽胞杆菌的生态学分布 | 第14页 |
| ·苏云金芽胞杆菌杀虫晶体蛋白 | 第14-18页 |
| ·杀虫晶体蛋白的分类 | 第14-16页 |
| ·杀虫晶体蛋白的定位 | 第16-17页 |
| ·杀虫晶体蛋白的三维空间结构 | 第17-18页 |
| ·杀虫晶体蛋白的作用机制 | 第18-20页 |
| ·CodY的研究进展 | 第20-26页 |
| ·全局性转录调控因子CodY简介 | 第20页 |
| ·CodY的结构 | 第20-21页 |
| ·CodY在细菌中的调控方式 | 第21-23页 |
| ·CodY蛋白的效应物分子 | 第21-22页 |
| ·CodY蛋白的调控方式研究 | 第22-23页 |
| ·CodY对枯草芽胞杆菌中sRNA的激活作用 | 第23页 |
| ·CodY的结合热点研究 | 第23-24页 |
| ·CodY对毒力因子表达调控研究进展 | 第24-26页 |
| ·cry2类基因 | 第26-28页 |
| ·Cry2类蛋白简介 | 第26页 |
| ·cry2A类基因研究进展 | 第26-27页 |
| ·cry基因转录水平的调控 | 第27-28页 |
| ·依赖于芽胞形成cry基因的转录调控 | 第27-28页 |
| ·不依赖于芽胞形成cry基因的转录调控 | 第28页 |
| ·常用蛋白质与DNA相互作用方法简介 | 第28-31页 |
| ·体外研究技术 | 第28-30页 |
| ·凝胶迁移阻滞实验 | 第28-29页 |
| ·DNaseI足迹试验 | 第29页 |
| ·甲基化干扰实验 | 第29-30页 |
| ·体内研究技术 | 第30-31页 |
| ·体内足迹试验 | 第30页 |
| ·噬菌体展示技术 | 第30页 |
| ·酵母单杂交技术 | 第30-31页 |
| ·细菌单杂交技术 | 第31页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第31-32页 |
| 2 材料与方法 | 第32-46页 |
| ·实验材料 | 第32-34页 |
| ·菌株、质粒及引物 | 第32-33页 |
| ·培养基的配制方法及成分 | 第33-34页 |
| ·抗生素及其使用浓度 | 第34页 |
| ·常用试剂和仪器 | 第34-37页 |
| ·常用试剂 | 第34页 |
| ·常用缓冲液和溶液 | 第34-37页 |
| ·质粒和总DNA抽提、感受态制备所需试剂 | 第34-35页 |
| ·Southern blot相关溶液 | 第35-36页 |
| ·SDS-PAGE相关溶液 | 第36页 |
| ·Western blot相关溶液 | 第36-37页 |
| ·常用仪器 | 第37页 |
| ·实验方法 | 第37-46页 |
| ·DNA抽提操作方法 | 第37-38页 |
| ·大肠杆菌质粒的抽提 | 第37-38页 |
| ·Bt质粒的抽提 | 第38页 |
| ·Bt总DNA的抽提 | 第38页 |
| ·Bt中RNA抽提操作方法 | 第38-39页 |
| ·DNA的体外分子克隆操作 | 第39-42页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备与转化 | 第39-40页 |
| ·Bt感受态细胞的制备与转化 | 第40-41页 |
| ·PCR扩增 | 第41页 |
| ·RT-PCR扩增 | 第41-42页 |
| ·SDS-PAGE电泳 | 第42页 |
| ·Western blot操作流程 | 第42-43页 |
| ·Southern blot操作流程 | 第43-46页 |
| ·探针标记 | 第43页 |
| ·探针标记效率检测 | 第43-44页 |
| ·预杂交和杂交 | 第44页 |
| ·洗膜 | 第44页 |
| ·检测 | 第44-46页 |
| 3 结果与分析 | 第46-64页 |
| ·cry2A类基因在其他Bt菌株中信息分析 | 第46页 |
| ·Cry2Ac蛋白刺激表达初步分析 | 第46-48页 |
| ·codY与cry2Ac转录水平分析 | 第48-50页 |
| ·YBT-881和YBT-881-L1生长曲线的测定 | 第48-49页 |
| ·codY与cry2Ac基因的RT-PCR验证 | 第49-50页 |
| ·cry2Ac基因Southern blot分析 | 第50-52页 |
| ·cry2Ac基因侧翼序列的获取与分析 | 第52-54页 |
| ·TAIL-PCR获取基因侧翼序列 | 第52-53页 |
| ·cry2Ac基因侧翼序列分析 | 第53-54页 |
| ·CodY蛋白细菌单杂交体系的构建与验证 | 第54-58页 |
| ·CodY蛋白单杂交体系的构建 | 第54-57页 |
| ·文库载体pTRG-codY的构建 | 第54-55页 |
| ·诱饵载体pBXcm-TcodyB的构建 | 第55-57页 |
| ·CodY蛋白单杂交体系的验证 | 第57-58页 |
| ·CodY与cry2Ac基因启动子分析 | 第58-64页 |
| ·细菌单杂交方法验证 | 第58-60页 |
| ·BMB171共转化验证 | 第60-61页 |
| ·BMB171cry2Ac~+和BMB171codY~+cry2Ac~+相差显微镜镜检 | 第61-62页 |
| ·BMB171cry2Ac~+和BMB171codY~+cry2Ac~+SDS-PAGE分析 | 第62-63页 |
| ·BMB171cry2Ac~+和BMB171codY~+cry2Ac~+Western blot分析 | 第63-64页 |
| 4 讨论 | 第64-66页 |
| 参考文献 | 第66-76页 |
| 致谢 | 第76-77页 |
| 附录 | 第77-79页 |
