| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 目录 | 第9-11页 |
| 前言 | 第11-18页 |
| 1. 研究概况 | 第11-12页 |
| 2 猪附红细胞体病的发病和流行特点及其防治方法 | 第12-13页 |
| 3 猪附红细胞体病诊断方法的研究进展 | 第13-14页 |
| ·形态学观察 | 第13页 |
| ·酶联免疫吸附试验 | 第13页 |
| ·聚合酶链式反应 | 第13-14页 |
| ·单克隆抗体技术 | 第14页 |
| ·环介导等温扩增技术 | 第14页 |
| 4 猪附红细胞体基因及蛋白研究进展 | 第14-16页 |
| 5 本研究的目的及意义 | 第16-18页 |
| 材料与方法 | 第18-29页 |
| 1 材料 | 第18-21页 |
| ·试验样本 | 第18页 |
| ·常用载体和感受态菌 | 第18页 |
| ·实验所需酶和试剂 | 第18页 |
| ·主要仪器设备 | 第18-19页 |
| ·试验所用部分试剂 | 第19-21页 |
| 2 方法 | 第21-29页 |
| ·引物的设计 | 第21页 |
| ·血液基因组DNA的提取 | 第21页 |
| ·OxaA蛋白生物信息学 | 第21-22页 |
| ·吉林株OxaA基因的PCR扩增 | 第22页 |
| ·吉林株OxaA基因的纯化回收 | 第22页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第22页 |
| ·猪附红细胞体OxaA基因的克隆与鉴定 | 第22-23页 |
| ·OxaA基因膜外区片段的PCR扩增 | 第23-24页 |
| ·膜外区片段A和B的纯化与回收 | 第24页 |
| ·猪附红细胞体OxaA基因膜外区片段的克隆与鉴定 | 第24页 |
| ·猪附红细胞体OxaA基因膜外区片段的亚克隆与鉴定 | 第24-25页 |
| ·表达菌株的诱导表达 | 第25页 |
| ·诱导产物的SDS聚丙烯酰胺电泳 | 第25-26页 |
| ·表达产物的Western blotting分析 | 第26页 |
| ·重组蛋白的纯化 | 第26-27页 |
| ·建立重组蛋白的间接ELISA方法 | 第27-29页 |
| 结果 | 第29-45页 |
| 1 吉林株OxaA基因的PCR扩增 | 第29页 |
| 2. 猪附红细胞体OxaA基因的克隆与鉴定 | 第29-30页 |
| 3 吉林株猪附红细胞体OxaA基因的生物信息分析 | 第30-35页 |
| 4 OxaA基因膜外区片段的PCR扩增 | 第35页 |
| 5 膜外区片段重组克隆质粒的PCR及酶切鉴定 | 第35-36页 |
| 6 膜外区片段膜外区片段重组表达质粒的PCR及酶切鉴定 | 第36-37页 |
| 7 表达菌株的诱导表达 | 第37页 |
| 8 表达产物的免疫印迹分析 | 第37-38页 |
| 9 重组A蛋白与重组B蛋白的可溶性分析 | 第38页 |
| 10 重组A蛋白与重组B蛋白的纯化 | 第38-39页 |
| 11 间接ELISA检测方法的建立 | 第39-45页 |
| ·纯化抗原最佳包被浓度的筛选与血清最佳稀释度的筛选 | 第39-40页 |
| ·最适封闭液的筛选和最佳封闭时间的筛选 | 第40-41页 |
| ·血清最佳作用时间的筛选 | 第41页 |
| ·酶标二抗最佳作用时间和最佳稀释度的筛选 | 第41-42页 |
| ·底物最适显色时间的筛选 | 第42页 |
| ·阳性和阴性临界值的确定 | 第42-43页 |
| ·特异性试验结果 | 第43页 |
| ·重复性试验结果 | 第43-44页 |
| ·临床样本检测结果 | 第44-45页 |
| 讨论 | 第45-48页 |
| 结论 | 第48-49页 |
| 参考文献 | 第49-54页 |
| 致谢 | 第54-55页 |
| 作者简介 | 第55-56页 |
| 附录 | 第56页 |
