| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-11页 |
| 前言 | 第11-15页 |
| 1. 猪附红细胞体病的研究概述 | 第11-13页 |
| ·病原学研究 | 第11-12页 |
| ·流行病学及危害 | 第12页 |
| ·临床症状 | 第12页 |
| ·病理变化 | 第12-13页 |
| 2. 诊断及检测方法 | 第13页 |
| 3. 猪附红细胞体病的防治 | 第13-14页 |
| 4. α-烯醇化酶基因 | 第14页 |
| 5. 本研究的目的及意义 | 第14-15页 |
| 材料与方法 | 第15-27页 |
| 1. 材料 | 第15-18页 |
| ·抗凝血、血清、载体及细胞 | 第15页 |
| ·试验药品 | 第15-16页 |
| ·工具酶及试剂盒 | 第15页 |
| ·试验所用主要试剂 | 第15-16页 |
| ·试验仪器 | 第16页 |
| ·主要试剂与配制 | 第16-18页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳所用试剂 | 第16-17页 |
| ·培养基的配制 | 第17页 |
| ·SDS-PAGE所用试剂 | 第17页 |
| ·Western blot所用试剂 | 第17-18页 |
| ·间接ELISA所用主要试剂 | 第18页 |
| 2. 方法 | 第18-27页 |
| ·猪附红细胞体α-烯醇化酶基因的原核表达 | 第18-23页 |
| ·引物的设计与合成 | 第18-19页 |
| ·DNA的提取及目的基因PCR的扩增 | 第19页 |
| ·感受态细胞的制备过程 | 第19页 |
| ·α-烯醇化酶基因的连接和转化 | 第19-20页 |
| ·重组质粒的提取 | 第20页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第20页 |
| ·pMD18-T-Eno的构建 | 第20-21页 |
| ·pMD18-T-Eno的鉴定 | 第21页 |
| ·pGEX-4T-Eno的诱导表达 | 第21页 |
| ·表达产物的SDS-PAGE电泳 | 第21-22页 |
| ·表达产物的Western blot分析 | 第22页 |
| ·重组蛋白的纯化与鉴定 | 第22-23页 |
| ·猪附红细胞体α-烯醇化酶基因的真核表达 | 第23-24页 |
| ·pVAX-Eno的构建及鉴定 | 第23页 |
| ·转染非洲绿猴肾细胞 | 第23-24页 |
| ·间接免疫荧光检测 | 第24页 |
| ·重组蛋白间接ELISA方法的建立 | 第24-27页 |
| ·最优包被浓度与最优血清稀释度的筛选 | 第24页 |
| ·最优包被时间的筛选 | 第24页 |
| ·封闭液及封闭时间的筛选 | 第24-25页 |
| ·血清作用时间的筛选 | 第25页 |
| ·酶标二抗的稀释倍数及其作用时间的筛选 | 第25页 |
| ·OPD最优显色时间的筛选 | 第25页 |
| ·间接ELISA检测试验的临界值 | 第25页 |
| ·特异性试验 | 第25-26页 |
| ·重复性试验 | 第26页 |
| ·敏感性试验 | 第26页 |
| ·临床样本检测 | 第26页 |
| ·间接ELISA与IHA检测方法的比较 | 第26-27页 |
| 结果 | 第27-42页 |
| 1 猪附红细胞体α-烯醇化酶基因的原核表达 | 第27-31页 |
| ·聚合酶链式反应扩增结果 | 第27页 |
| ·目的基因的克隆及鉴定 | 第27-28页 |
| ·测序及序列分析 | 第28-29页 |
| ·pGEX-4T-Eno的构建及其鉴定结果 | 第29页 |
| ·SDS-PAGE结果 | 第29-30页 |
| ·Western blot印迹结果 | 第30页 |
| ·猪附红细胞体重组蛋白的纯化结果 | 第30-31页 |
| 2 猪附红细胞体α-烯醇化酶基因的真核表达结果 | 第31-32页 |
| ·pVAX-4T-Eno的构建及鉴定 | 第31-32页 |
| ·IFAT检测结果 | 第32页 |
| 3 猪附红细胞体重组蛋白的间接ELISA检测方法的建立 | 第32-42页 |
| ·最优包被浓度和血清最优稀释度的筛选 | 第32-33页 |
| ·最优包被条件的筛选结果 | 第33-34页 |
| ·最优封闭液和最优反应时间的筛选 | 第34-35页 |
| ·血清最优作用时间的筛选 | 第35-36页 |
| ·酶标二抗最优稀释倍数与最优作用时间的筛选 | 第36-37页 |
| ·底物OPD显色时间的筛选 | 第37-38页 |
| ·间接ELISA阴、阳性临界值的确定 | 第38页 |
| ·特异性试验结果 | 第38-39页 |
| ·敏感性试验结果 | 第39页 |
| ·重复性试验结果 | 第39-40页 |
| ·临床样本检测结果 | 第40页 |
| ·间接ELISA与IHA检测方法的比较结果 | 第40-42页 |
| 讨论 | 第42-45页 |
| 结论 | 第45-46页 |
| 参考文献 | 第46-52页 |
| 致谢 | 第52-53页 |
| 个人简介 | 第53-54页 |
| 在研期间发表的论文 | 第54页 |