| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 缩略词中英文对照表 | 第9-11页 |
| 目录 | 第11-14页 |
| 前言 | 第14-21页 |
| 材料与方法 | 第21-44页 |
| 材料 | 第21-25页 |
| ·实验菌种、细胞及实验动物 | 第21页 |
| ·主要试剂 | 第21页 |
| ·主要试剂配制 | 第21-23页 |
| ·核酸电泳相关试剂的配制 | 第21-22页 |
| ·蛋白质电泳相关试剂及缓冲液的配制 | 第22页 |
| ·ELISA常用试剂配制 | 第22-23页 |
| ·Dot-blotting试剂配制 | 第23页 |
| ·Western-blot试剂配制 | 第23页 |
| ·主要仪器 | 第23-25页 |
| 方法 | 第25-44页 |
| ·引物设计和合成 | 第25-26页 |
| ·绵羊血白细胞层总RNA提取 | 第26页 |
| ·总RNA中基因组DNA清除 | 第26-27页 |
| ·总RNA净化、浓缩以及RNA中蛋白清除 | 第27页 |
| ·总RNA反转录成cDNA | 第27-28页 |
| ·cdc42全长cDNA克隆及差异表达分析 | 第28-35页 |
| ·RNA反转录成3’RACE cDNA与5’RACE cDNA | 第28-29页 |
| ·巢式PCR扩增5’RACE全长cDNA与3’RACE全长cDNA | 第29-31页 |
| ·3’RACE PCR与5’RACE PCR产物的纯化回收 | 第31-32页 |
| ·感受态DH5 α与BL21的制备 | 第32页 |
| ·3’RACE与5’RACE纯化回收产物与pMD 18-T Vector克隆载体的连接与转化 | 第32页 |
| ·cdc42基因的筛选 | 第32-33页 |
| ·基因cdc42生物信息学分析 | 第33-34页 |
| ·基因cdc42差异表达分析 | 第34-35页 |
| ·cdc42原核表达目的片段扩增 | 第35页 |
| ·基因cdc42重组克隆载体的构建 | 第35-37页 |
| ·基因cdc42的重组表达载体的构建 | 第37-38页 |
| ·基因cdc42重组表达质粒的诱导表达 | 第38页 |
| ·Cdc42诱导表达产物SDS-PAGE电泳 | 第38-39页 |
| ·Cdc42重组蛋白纯化 | 第39-40页 |
| ·重组蛋白存在形式确定 | 第39-40页 |
| ·包涵体的大量纯化 | 第40页 |
| ·实验动物免疫 | 第40-41页 |
| ·血清效价检测 | 第41页 |
| ·细胞融合 | 第41-42页 |
| ·饲养层细胞获取 | 第41页 |
| ·细胞融合 | 第41-42页 |
| ·阳性杂交瘤细胞筛选与克隆 | 第42页 |
| ·单克隆抗体亚型鉴定 | 第42页 |
| ·单克隆抗体腹水制备及效价测定 | 第42-43页 |
| ·抗羊Cdc42单克隆抗体与天然羊Cdc42结合活性分析 | 第43-44页 |
| ·Dot-Blot结合活性分析 | 第43页 |
| ·Western-Blot结合活性分析 | 第43-44页 |
| 结果 | 第44-65页 |
| ·绵羊基因cdc42全长cDNA扩增及差异表达分析 | 第44-53页 |
| ·绵羊总RNA提取结果 | 第44-46页 |
| ·cdc42基因3’RACE与5’RACE PCR扩增结果 | 第46页 |
| ·cdc42基因3’RACE与5’RACE目的片段回收结果 | 第46-47页 |
| ·cdc42基因3’RACE与5’RACE菌液PCR鉴定结果 | 第47-48页 |
| ·基因cdc42 cDNA全长序列 | 第48页 |
| ·基因cdc42生物信息学分析 | 第48-52页 |
| ·cdc42基因差异表达分析 | 第52-53页 |
| ·基因cdc42原核表达 | 第53-58页 |
| ·cdc42完整ORF的PCR扩增 | 第53-54页 |
| ·cdc42 pMD18-T重组克隆质粒双酶切鉴定 | 第54-55页 |
| ·cdc42目的基因测序及分析 | 第55页 |
| ·Cdc42重组克隆质粒双酶切鉴定 | 第55页 |
| ·Cdc42重组表达载体构建 | 第55-58页 |
| ·蛋白诱导与纯化 | 第58-61页 |
| ·蛋白诱导条件优化 | 第58页 |
| ·重组Cdc42表达形式鉴定 | 第58-60页 |
| ·蛋白Cdc42诱导表达及纯化 | 第60-61页 |
| ·抗Cdc42单克隆抗体制备 | 第61-65页 |
| ·小鼠血清效价检测结果 | 第61-62页 |
| ·细胞融合结果 | 第62页 |
| ·单克隆抗体的亚类鉴定 | 第62页 |
| ·抗体特异性鉴定 | 第62-65页 |
| 讨论 | 第65-68页 |
| 结论 | 第68-69页 |
| 参考文献 | 第69-77页 |
| 致谢 | 第77-78页 |
| 作者简介 | 第78-79页 |
| 在读期间发表的论文 | 第79页 |
