| 中文摘要 | 第1-13页 |
| ABSTRACT | 第13-17页 |
| 第一章 文献综述 | 第17-29页 |
| ·四膜虫概述 | 第17-25页 |
| ·四膜虫的形态 | 第17-18页 |
| ·四膜虫的进化地位 | 第18-19页 |
| ·四膜虫核的二态性 | 第19页 |
| ·四膜虫的生殖 | 第19-24页 |
| ·嗜热四膜虫的培养与应用 | 第24-25页 |
| ·锌指蛋白概述 | 第25-27页 |
| ·锌指结构域的分类 | 第25-26页 |
| ·锌指蛋白的功能 | 第26-27页 |
| ·嗜热四膜虫锌指结构域蛋白及本课题研究意义 | 第27-28页 |
| ·实验设计 | 第28-29页 |
| 第二章 嗜热四膜虫中ZFR1基因的功能分析 | 第29-67页 |
| ·材料 | 第29-33页 |
| ·菌株与质粒 | 第29页 |
| ·试剂与工具酶 | 第29-30页 |
| ·主要试剂 | 第30-31页 |
| ·主要实验仪器 | 第31-32页 |
| ·PCR扩增引物 | 第32-33页 |
| ·方法 | 第33-44页 |
| ·嗜热四膜虫细胞的培养、饥饿和配对 | 第33-34页 |
| ·嗜热四膜虫基因组的提取 | 第34页 |
| ·ZFR1基因的克隆 | 第34-35页 |
| ·ZFR1基因的生物信息学分析 | 第35-36页 |
| ·ZFR1基因的表达谱分析 | 第36页 |
| ·ZFR1基因大核敲除载体的构建 | 第36-37页 |
| ·构建体DNA片段浓缩 | 第37页 |
| ·嗜热四膜虫的转化 | 第37-38页 |
| ·突变细胞株的筛选 | 第38-39页 |
| ·ZFR1突变株的qRT-PCR鉴定 | 第39页 |
| ·ZFR1基因敲除的突变体细胞株△ZFR1-B和△ZFR1-C的发育 | 第39页 |
| ·ZFR1敲除突变株后代存活分析 | 第39页 |
| ·HA-ZFR1的构建 | 第39-40页 |
| ·HA-ZFR1构建体的转化和重组突变细胞株筛选鉴定 | 第40页 |
| ·HA-ZFR1的蛋白免疫印迹 | 第40-41页 |
| ·免疫荧光定位 | 第41-42页 |
| ·HA-ZFR1过表达构建体(MTT1-HA-ZFR1)的构建 | 第42页 |
| ·HA-ZFR1过表达构建体的转化和突变细胞株的筛选鉴定 | 第42-43页 |
| ·Conjugation junction稳定性实验 | 第43页 |
| ·截断型ZFR1的构建 | 第43页 |
| ·蛋白转运抑制剂(Brefeldin A)处理HA-ZFR1突变细胞 | 第43-44页 |
| ·紫杉醇和秋水仙碱处理HA-ZFR1突变细胞 | 第44页 |
| ·结果 | 第44-62页 |
| ·ZFR1基因分析 | 第44-48页 |
| ·ZFR1对四膜虫营养生殖的功能不是必需的 | 第48-49页 |
| ·ZFR1影响嗜热四膜虫有性生殖进程 | 第49-53页 |
| ·ZFR1在嗜热四膜虫中的定位 | 第53-56页 |
| ·过表达的ZFR1在细胞中的定位 | 第56-58页 |
| ·过表达细胞株在有性生殖早期配对稳定性比较 | 第58页 |
| ·Zfrlp功能结构域的分析 | 第58-60页 |
| ·HA-Zfrl~(deNc)与中心蛋白centrin的共定位 | 第60页 |
| ·转运蛋白抑制剂BrefeldinA处理HA-Zfrlp后的定位 | 第60-62页 |
| ·讨论 | 第62-67页 |
| 第三章 嗜热四膜虫中ZFR2基因的功能分析 | 第67-95页 |
| ·材料 | 第67-69页 |
| ·菌株与质粒 | 第67页 |
| ·试剂与工具酶 | 第67页 |
| ·主要试剂配制 | 第67-68页 |
| ·主要实验仪器 | 第68页 |
| ·实验设计的引物 | 第68-69页 |
| ·方法 | 第69-73页 |
| ·嗜热四膜虫ZFR2基因的克隆 | 第69页 |
| ·ZFR2基因的生物信息学分析 | 第69-70页 |
| ·ZFR2基因的表达谱分析 | 第70页 |
| ·ZFR2基因大核敲除载体的构建 | 第70页 |
| ·大核突变细胞株的筛选 | 第70页 |
| ·HA-ZFR2过表达构建体的构建 | 第70页 |
| ·IES删除元件单细胞PCR检测 | 第70-71页 |
| ·染色体断裂检测分析 | 第71页 |
| ·H3K27me3的免疫荧光定位分析 | 第71-72页 |
| ·小RNA表达分析 | 第72页 |
| ·TUNEL检测 | 第72-73页 |
| ·结果 | 第73-89页 |
| ·ZFR2基因分析 | 第73-76页 |
| ·HA-Zfr2p在嗜热四膜虫中的定位 | 第76-80页 |
| ·ZFR2影响嗜热四膜虫有性生殖进程 | 第80-83页 |
| ·ZFR2是嗜热四膜虫中IES删除所必需的 | 第83-85页 |
| ·ZFR2调控嗜热四膜虫新大核发育过程中染色体断裂 | 第85-87页 |
| ·ZFR2不影响小RNA的产生 | 第87-88页 |
| ·ZFR2调节新大核中DNA elimination异染色质结构的形成 | 第88-89页 |
| ·ZFR2的敲除影响新大核DNA复制 | 第89页 |
| ·讨论 | 第89-95页 |
| 第四章 嗜热四膜虫中ZFR3基因的功能分析 | 第95-111页 |
| ·材料 | 第95-96页 |
| ·菌株与质粒 | 第95页 |
| ·试剂与工具酶 | 第95页 |
| ·主要试剂配制 | 第95页 |
| ·主要实验仪器 | 第95-96页 |
| ·实验设计的引物 | 第96页 |
| ·方法 | 第96-97页 |
| ·嗜热四膜虫ZFR3基因的克隆 | 第96页 |
| ·ZFR3基因的生物信息学分析 | 第96-97页 |
| ·ZFR3基因的表达谱分析 | 第97页 |
| ·ZFR3基因敲除载体的构建 | 第97页 |
| ·大核重组突变菌株的筛选 | 第97页 |
| ·HA-ZFR3过表达构建体(MTT1-HA-ZFR3)的构建 | 第97页 |
| ·结果 | 第97-109页 |
| ·ZFR3基因分析 | 第97-98页 |
| ·ZFR3荧光定量分析 | 第98-100页 |
| ·Zfr3p在嗜热四膜虫中的细胞定位 | 第100-102页 |
| ·Zfr3p不是嗜热四膜虫生长时期所必需的因子 | 第102-105页 |
| ·Zfr3p调控嗜热四膜虫有性生殖正常发育 | 第105-107页 |
| ·ZFR3大核敲除后影响了ZFR1和ZFR2的表达 | 第107-109页 |
| ·讨论 | 第109-111页 |
| 参考文献 | 第111-127页 |
| 总结与展望 | 第127-129页 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 | 第129-132页 |
| 致谢 | 第132-133页 |
| 个人简况及联系方式 | 第133-135页 |
