| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-10页 |
| 第一章 绪论 | 第10-23页 |
| ·转谷氨酰胺酶的概述 | 第10-16页 |
| ·转谷氨酰胺酶的催化机制及酶活测定 | 第10-11页 |
| ·转谷氨酰胺酶的分类 | 第11-12页 |
| ·转谷氨酰胺酶的结构 | 第12-13页 |
| ·转谷氨酰胺酶的作用 | 第13-16页 |
| ·转谷氨酰胺酶的生产 | 第16-18页 |
| ·野生菌发酵生产 | 第16-17页 |
| ·重组菌株发酵生产 | 第17-18页 |
| ·原核表达宿主的概述 | 第18-21页 |
| ·大肠杆菌表达系统 | 第18-19页 |
| ·枯草芽孢杆菌表达宿主 | 第19-21页 |
| ·本课题的研究意义及主要内容 | 第21-23页 |
| ·本课题来源 | 第21页 |
| ·本课题的研究意义 | 第21页 |
| ·本课题的研究内容 | 第21-23页 |
| 第二章 转谷氨酰胺酶酶原在大肠杆菌中的重组优化表达 | 第23-47页 |
| ·前言 | 第23页 |
| ·材料与方法 | 第23-27页 |
| ·主要仪器和设备 | 第23-24页 |
| ·菌株和质粒 | 第24页 |
| ·主要试剂和材料 | 第24-26页 |
| ·培养基与溶液的配置 | 第26页 |
| ·引物序列 | 第26-27页 |
| ·试验方法 | 第27-40页 |
| ·转谷氨酰胺酶酶原原始基因表达载体的构建 | 第27-32页 |
| ·转谷氨酰胺酶酶原优化基因表达载体的构建 | 第32-34页 |
| ·转谷氨酰胺酶酶原优化基因点突变表达载体的构建 | 第34-37页 |
| ·转谷氨酰胺酶酶原在大肠杆菌中的表达及纯化 | 第37-39页 |
| ·转谷氨酰胺酶的激活及酶活测定 | 第39-40页 |
| ·实验结果与讨论 | 第40-45页 |
| ·proMTG、proMTG 优化及 proMTG-S2P 表达载体的构建 | 第40-43页 |
| ·重组转谷氨酰胺酶酶原的高效表达及纯化 | 第43-44页 |
| ·酶活测定 | 第44-45页 |
| ·本章小结 | 第45-47页 |
| 第三章 转谷氨酰胺酶酶原的特异性激活 | 第47-73页 |
| ·前言 | 第47-48页 |
| ·材料与方法 | 第48-49页 |
| ·主要仪器和设备 | 第48页 |
| ·菌株和质粒 | 第48页 |
| ·主要试剂和材料 | 第48页 |
| ·培养基与溶液的配置 | 第48-49页 |
| ·引物序列 | 第49页 |
| ·试验方法 | 第49-60页 |
| ·pro-mMTG 表达质粒的构建 | 第49-52页 |
| ·pro-m-MTG 表达质粒的构建 | 第52-56页 |
| ·mpro-MTG 表达质粒的构建 | 第56-59页 |
| ·转谷氨酰胺酶酶原在大肠杆菌中的表达及纯化 | 第59-60页 |
| ·改造后转谷氨酰胺酶的激活及酶活测定 | 第60页 |
| ·改造后转谷氨酰胺酶的 BAS 交联反应 | 第60页 |
| ·实验结果与讨论 | 第60-72页 |
| ·pro-mMTG、pro-m-MTG 及 mpro-MTG 表达质粒的构建 | 第61-65页 |
| ·改造后转谷氨酰胺酶酶原的高效表达及纯化 | 第65-66页 |
| ·改造后转谷氨酰胺酶酶原激活及酶活测定 | 第66-70页 |
| ·BSA 蛋白交联 | 第70-71页 |
| ·肠激酶切割位点分析 | 第71-72页 |
| ·本章小结 | 第72-73页 |
| 第四章 成熟转谷氨酰胺酶的胞外表达 | 第73-88页 |
| ·前言 | 第73页 |
| ·材料与方法 | 第73-75页 |
| ·主要仪器和设备 | 第73-74页 |
| ·菌株和质粒 | 第74页 |
| ·主要试剂和材料 | 第74页 |
| ·培养基与溶液的配置 | 第74-75页 |
| ·引物序列 | 第75页 |
| ·试验方法 | 第75-80页 |
| ·SAMP45 表达菌株的构建 | 第75-78页 |
| ·proMTG 枯草杆菌表达质粒的构建 | 第78-79页 |
| ·MTG 的胞外分泌表达 | 第79-80页 |
| ·酶活测定 | 第80页 |
| ·实验结果与讨论 | 第80-87页 |
| ·B.subtilis WB800S 菌株的构建 | 第80-85页 |
| ·pBEP43-proMTG 质粒的构建 | 第85-86页 |
| ·MTG 的发酵生产 | 第86-87页 |
| ·本章小结 | 第87-88页 |
| 结论和展望 | 第88-89页 |
| 本论文的创新之处 | 第89-90页 |
| 参考文献 | 第90-94页 |
| 攻读硕士学位期间取得的研究成果 | 第94-95页 |
| 致谢 | 第95-96页 |
| 附录 | 第96页 |
