| 目录 | 第1-7页 |
| 摘要 | 第7-9页 |
| ABSTRACT | 第9-12页 |
| 第1章 文献综述 | 第12-28页 |
| ·多杀性巴氏杆菌研究概况 | 第12-16页 |
| ·历史和分类 | 第12页 |
| ·生物学特性 | 第12-14页 |
| ·流行病学 | 第14-15页 |
| ·致病机制 | 第15-16页 |
| ·多杀性巴氏杆菌毒力因子研究进展 | 第16-23页 |
| ·脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS) | 第16-17页 |
| ·荚膜(Capsule,CP) | 第17页 |
| ·多杀性巴氏杆菌毒素(Pasteurella multocida toxin,PMT) | 第17-18页 |
| ·铁调节和铁捕获蛋白(Iron regulated and iron acquisition proteins) | 第18页 |
| ·4型菌毛蛋白(Type 4 fimbrial subunit protein,PtfA) | 第18-19页 |
| ·外膜蛋白(Outer membrane proteins,OMPs) | 第19-23页 |
| ·多杀性巴氏杆菌研究常用分子生物学技术发展概述 | 第23-28页 |
| ·实时荧光定量PCR(Quantitative real-time PCR,QRT-PCR) | 第24-25页 |
| ·微生物基因敲除技术(Gene knock-out in microorganism) | 第25-26页 |
| ·基因定位诱变(Site-directed mutagenesis) | 第26-28页 |
| 第2章 引言 | 第28-30页 |
| ·研究目的与意义 | 第28页 |
| ·主要内容 | 第28-29页 |
| ·技术路线 | 第29-30页 |
| 第3章 6株牛源荚膜血清A型多杀性巴氏杆菌毒力相关基因的克隆及序列分析 | 第30-46页 |
| ·材料 | 第30-32页 |
| ·菌株 | 第30页 |
| ·主要试剂 | 第30-32页 |
| ·主要仪器 | 第32页 |
| ·方法 | 第32-35页 |
| ·多杀性巴氏杆菌基因组DNA的提取 | 第32页 |
| ·毒力相关基因引物设计及其PCR扩增 | 第32-34页 |
| ·PCR产物的回收 | 第34页 |
| ·目的基因的连接与转化 | 第34页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第34-35页 |
| ·结果 | 第35-44页 |
| ·目的基因的扩增 | 第35-37页 |
| ·重组质粒的鉴定结果 | 第37-39页 |
| ·序列测定及分析 | 第39-44页 |
| ·讨论 | 第44-46页 |
| 第4章 牛源荚膜血清A型多杀性巴氏杆菌毒力相关基因SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR方法的建立 | 第46-64页 |
| ·材料 | 第46-48页 |
| ·菌株 | 第46页 |
| ·实验动物 | 第46页 |
| ·主要试剂 | 第46-47页 |
| ·主要仪器 | 第47-48页 |
| ·方法 | 第48-52页 |
| ·样品采集 | 第48页 |
| ·总RNA的提取与纯化 | 第48-49页 |
| ·cDNA的制备 | 第49页 |
| ·定量PCR引物的设计 | 第49-50页 |
| ·SYBR Green Ⅰ实时定量PCR反应体系 | 第50页 |
| ·退火温度的优化 | 第50-51页 |
| ·构建标准曲线进行反应的评估 | 第51-52页 |
| ·结果 | 第52-62页 |
| ·实时定量PCR引物及其合成 | 第52-53页 |
| ·确定最佳退火温度 | 第53-57页 |
| ·确定SYBR Green Ⅰ定量PCR反应性能 | 第57-62页 |
| ·讨论 | 第62-64页 |
| 第5章 两株牛源荚膜血清A型多杀性巴氏杆菌毒力相关基因体内外表达差异的研究 | 第64-78页 |
| ·材料 | 第64-65页 |
| ·菌株 | 第64页 |
| ·实验动物 | 第64页 |
| ·主要试剂 | 第64页 |
| ·主要仪器 | 第64-65页 |
| ·方法 | 第65-67页 |
| ·实验设计及样品采集 | 第65页 |
| ·细菌菌落计数 | 第65页 |
| ·在小鼠体内培养的P multocida CQ2 & CQ6总RNA提取及纯化 | 第65页 |
| ·在体外培养的P.multocida CQ2 & CQ6总RNA提取及纯化 | 第65-66页 |
| ·cDNA的制备 | 第66页 |
| ·SYBR Green-Ⅰ实时荧光定量PCR的反应条件 | 第66页 |
| ·内参与对照设置 | 第66-67页 |
| ·数据处理与统计分析 | 第67页 |
| ·结果 | 第67-75页 |
| ·P.multocida CQ2 & CQ6在小鼠体内的动态分布 | 第67-69页 |
| ·P.multocida CQ2 & CQ6毒力相关基因在体外的相对表达比较 | 第69-70页 |
| ·P.multocida CQ2 & CQ6毒力相关基因在小鼠体内表达的动态分布与比较 | 第70-75页 |
| ·讨论 | 第75-78页 |
| 第6章 全文总结 | 第78-80页 |
| ·结论 | 第78-79页 |
| ·研究设想 | 第79-80页 |
| 参考文献 | 第80-88页 |
| 附录 | 第88-90页 |
| 致谢 | 第90-92页 |
| 在学期间所发表的论文 | 第92页 |
