| 摘要 | 第1-12页 |
| ABSTRACT | 第12-18页 |
| 缩略词表 | 第18-19页 |
| 第一篇 胚胎干细胞研究概述 | 第19-36页 |
| 1 干细胞的研究进展 | 第19-25页 |
| ·哺乳动物胚胎干细胞的研究进展 | 第19-21页 |
| ·干细胞的调控 | 第21-23页 |
| ·iPS细胞 | 第23-25页 |
| 2 干细胞标记基因的表达 | 第25-26页 |
| 3 影响胚胎干细胞建系的因素 | 第26-28页 |
| ·获得内细胞团的方式 | 第26-27页 |
| ·饲养层 | 第27页 |
| ·培养液 | 第27-28页 |
| ·传代方法 | 第28页 |
| 4 胚胎干细胞的应用及面临的主要问题 | 第28-29页 |
| 参考文献 | 第29-36页 |
| 第二篇 阿尔巴斯白绒山羊胚胎干细胞的培养 | 第36-81页 |
| 第一章 阿尔巴斯白绒山羊胚胎干细胞的培养 | 第36-50页 |
| 前言 | 第36-37页 |
| 1 材料 | 第37-39页 |
| ·主要仪器设备 | 第37-38页 |
| ·实验动物 | 第38页 |
| ·实验试剂及耗材 | 第38页 |
| ·培养液 | 第38-39页 |
| 2 实验方法 | 第39-41页 |
| ·胎鼠成纤维细胞的原代培养 | 第39页 |
| ·饲养层的制备 | 第39页 |
| ·体内受精胚胎的获得 | 第39-40页 |
| ·同源性比较分析确立AgESC的培养液 | 第40页 |
| ·内细胞团的获得及培养 | 第40页 |
| ·AgESC的传代 | 第40-41页 |
| ·碱性磷酸酶染色 | 第41页 |
| ·类胚体形成实验 | 第41页 |
| 3 结果 | 第41-47页 |
| ·比较两种体内受精胚胎的获得方法 | 第41-42页 |
| ·同源性结果分析 | 第42-43页 |
| ·不同培养液对获得胚胎内细胞团的影响 | 第43-44页 |
| ·胚胎干细胞的形态鉴定 | 第44页 |
| ·两种传代方法对AgESC传代的影响 | 第44-46页 |
| ·两种不同的培养液所培养的AgESC的碱性磷酸酶染色情况 | 第46页 |
| ·AgESC的体外分化情况 | 第46-47页 |
| 4 讨论 | 第47-50页 |
| 第二章 阿尔巴斯白绒山羊胚胎干细胞的冷冻保存、复苏 | 第50-63页 |
| 前言 | 第50-51页 |
| 1 材料 | 第51-53页 |
| ·主要仪器设备 | 第51页 |
| ·实验动物 | 第51-52页 |
| ·实验试剂及耗材 | 第52页 |
| ·培养液 | 第52-53页 |
| 2 实验方法 | 第53-56页 |
| ·胎鼠成纤维细胞的原代培养 | 第53页 |
| ·饲养层的制备 | 第53页 |
| ·体内受精胚胎的获得 | 第53-54页 |
| ·内细胞团的获得及培养 | 第54页 |
| ·AgESC的机械传代 | 第54页 |
| ·AgESC的冷冻保存及复苏解冻 | 第54-55页 |
| ·碱性磷酸酶染色 | 第55页 |
| ·免疫荧光染色 | 第55页 |
| ·PCR检测鉴定 | 第55-56页 |
| 3 结果 | 第56-61页 |
| ·冷冻保存、复苏对AgESC的影响 | 第56-60页 |
| ·冷冻、复苏后胚胎干细胞的PCR检测鉴定 | 第60-61页 |
| 4 讨论 | 第61-63页 |
| 第三章 采用两种不同的方法获得阿尔巴斯白绒山羊胚胎的内细胞团培养胚胎干细胞 | 第63-75页 |
| 前言 | 第63-64页 |
| 1 材料 | 第64-65页 |
| ·主要仪器设备 | 第64页 |
| ·实验动物 | 第64页 |
| ·实试剂及耗材 | 第64-65页 |
| ·培养液 | 第65页 |
| 2 实验方法 | 第65-69页 |
| ·胎鼠成纤维细胞的原代培养 | 第65-66页 |
| ·饲养层的制备 | 第66页 |
| ·体内受精胚胎的获得 | 第66-67页 |
| ·抗血清的制备及抗体效价的测定 | 第67页 |
| ·囊胚的内细胞团的获得 | 第67-68页 |
| ·AgESC的机械传代 | 第68页 |
| ·碱性磷酸酶染色 | 第68页 |
| ·免疫荧光染色 | 第68-69页 |
| 3 结果 | 第69-74页 |
| ·抗血清的效价 | 第69页 |
| ·不同方法获得内细胞团后AgESC的形态鉴定 | 第69-70页 |
| ·不同方法获得内细胞团后AgESC的碱性磷酸酶染色鉴定 | 第70-71页 |
| ·不同方法获得内细胞团后AgESC的体外分化检测 | 第71-72页 |
| ·不同方法获得内细胞团后AgESC的免疫荧光检测 | 第72-74页 |
| 4 讨论 | 第74-75页 |
| 参考文献 | 第75-81页 |
| 第三篇 绵羊胚胎干细胞的培养 | 第81-108页 |
| 第一章 绵羊胚胎干细胞培养体系的探索 | 第81-92页 |
| 前言 | 第81-82页 |
| 1 材料 | 第82-83页 |
| ·主要仪器设备 | 第82页 |
| ·实验动物 | 第82页 |
| ·实验试剂及耗材 | 第82-83页 |
| ·培养液 | 第83页 |
| 2 实验方法 | 第83-87页 |
| ·胎鼠成纤维细胞的原代培养 | 第84页 |
| ·饲养层的制备 | 第84页 |
| ·绵羊卵母细胞的体外成熟 | 第84-85页 |
| ·绵羊冷冻精液的制备 | 第85页 |
| ·绵羊体外受精及体外发育 | 第85页 |
| ·内细胞团的获得及培养 | 第85-86页 |
| ·SESC的机械传代 | 第86页 |
| ·碱性磷酸酶染色 | 第86页 |
| ·免疫荧光染色 | 第86-87页 |
| 3 结果 | 第87-90页 |
| ·绵羊精液的冷冻保存 | 第87页 |
| ·绵羊体外受精胚胎的生产及贴壁培养 | 第87-88页 |
| ·SESC的培养及形态鉴定 | 第88页 |
| ·SESC的传代 | 第88-89页 |
| ·SESC的碱性磷酸酶染色 | 第89-90页 |
| ·SESC的免疫荧光染色 | 第90页 |
| 4 讨论 | 第90-92页 |
| 第二章 采用阿尔巴斯白绒山羊胚胎干细胞培养体系培养绵羊胚胎干细胞的效果 | 第92-104页 |
| 前言 | 第92-93页 |
| 1 材料 | 第93-94页 |
| ·主要仪器设备 | 第93页 |
| ·实验动物 | 第93页 |
| ·实验试剂及耗材 | 第93-94页 |
| ·培养液 | 第94页 |
| 2 实验方法 | 第94-97页 |
| ·胎鼠成纤维细胞的原代培养 | 第94-95页 |
| ·饲养层的制备 | 第95页 |
| ·绵羊卵母细胞的体外成熟 | 第95页 |
| ·绵羊冷冻精液的制备 | 第95页 |
| ·体外受精及体外发育 | 第95-96页 |
| ·内细胞团的获得及培养 | 第96页 |
| ·SESC的机械传代 | 第96页 |
| ·碱性磷酸酶染色 | 第96页 |
| ·免疫荧光染色 | 第96-97页 |
| 3 结果 | 第97-102页 |
| ·两种培养液对原代SESC的生长的影响 | 第97-98页 |
| ·两种培养液培养的SESC的形态鉴定 | 第98页 |
| ·两种培养液培养的SESC的传代 | 第98-99页 |
| ·两种培养液培养的SESC的碱性磷酸酶染色 | 第99页 |
| ·两种培养液培养的SESC的体外分化鉴定 | 第99-100页 |
| ·两种培养液培养的SESC的免疫荧光染色鉴定 | 第100-102页 |
| 4 讨论 | 第102-104页 |
| 参考文献 | 第104-108页 |
| 结论 | 第108-110页 |
| 致谢 | 第110-112页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第112-113页 |
