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农杆菌介导T-DNA转化黑曲霉的初步研究

学位论文数据集第1-4页
摘要第4-6页
ABSTRACT第6-15页
第一章 绪论第15-25页
   ·丝状真菌概述第15-16页
   ·真菌遗传转化第16-20页
     ·CaCl_2/PEG 介导法第16页
     ·电穿孔法第16页
     ·限制性内切酶介导的转化第16-17页
     ·农杆菌介导的丝状真菌转化第17-19页
     ·选择标记第19-20页
   ·真菌遗传转化系统的应用第20-21页
     ·利用基因敲除的方法研究基因功能第20页
     ·利用基因插入突变、克隆相关基因第20页
     ·基因改造第20-21页
   ·黑曲霉及产酶的研究第21-22页
     ·黑曲霉第21页
     ·木聚糖、木聚糖酶及木糖苷酶第21-22页
   ·展望第22页
   ·本论文的目的与主要研究内容第22-25页
第二章 载体 pBI-hph 的构建第25-33页
   ·实验材料与仪器设备第25-26页
     ·质粒与菌株第25页
     ·工具酶与试剂第25-26页
     ·主要软件第26页
     ·实验仪器第26页
   ·实验方法第26-28页
     ·载体 pBI-hph 的构建第26-28页
     ·大肠杆菌的转化第28页
     ·农杆菌的转化第28页
   ·结果与讨论第28-31页
     ·hph 表达盒的获得第28-30页
     ·载体 pBI-hph 的构建及验证第30-31页
   ·本章小结第31-33页
第三章 农杆菌介导的黑曲霉转化第33-41页
   ·实验材料与仪器第33-34页
     ·实验质粒及菌株第33页
     ·所用试剂第33-34页
     ·实验设备第34页
   ·实验方法第34-37页
     ·潮霉素 B 及头孢噻肟浓度的确定第34-35页
     ·农杆菌介导的黑曲霉转化第35页
     ·载体 pBI-hph 与 pPK2 转化效率的比较第35页
     ·转化菌株的验证第35-37页
   ·结果与讨论第37-40页
     ·潮霉素 B 及头孢噻肟浓度的确定第37页
     ·转化结果第37-38页
     ·遗传稳定性分析第38页
     ·转化子的验证与分析第38-40页
   ·本章小结第40-41页
第四章 转化条件优化第41-49页
   ·实验材料与仪器设备第41页
     ·实验材料第41页
     ·仪器与设备第41页
   ·实验方法第41-42页
     ·转化菌株酶活测定第41-42页
   ·结果与讨论第42-48页
     ·农杆菌的诱导时间对转化效率的影响第42-43页
     ·不同 AS 浓度对转化效率的影响第43-44页
     ·培养基不同 pH 对转化效率的影响第44页
     ·农杆菌的初始浓度对转化效率的影响第44-45页
     ·共培养时间对转化效率的影响第45-46页
     ·不同受体形式对转化效率的影响第46-47页
     ·转化菌株酶活测定第47-48页
   ·本章小结第48-49页
第五章 高产木糖苷酶黑曲霉菌株的初步构建第49-59页
   ·实验材料第49页
   ·实验方法第49-52页
     ·木糖苷酶基因的测序第49页
     ·载体 pPK2-XlnD 的构建第49-52页
   ·结果与讨论第52-57页
     ·XlnD 测序结果第52-54页
     ·PCR 及纯化第54-56页
     ·菌落 PCR 验证第56页
     ·酶切验证第56-57页
   ·本章小结第57-59页
第六章 结论与分析第59-61页
参考文献第61-65页
附录第65-75页
致谢第75-77页
研究成果及发表的学术论文第77-79页
作者及导师简介第79-80页
硕士研究生学位论文答辩委员会决议书第80-81页

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