| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-14页 |
| 缩写词表（Abbreviations) | 第14-16页 |
| 目录 | 第16-21页 |
| 前言 | 第21-23页 |
| 第一部分 文献综述 | 第23-37页 |
| 1 后备母猪繁殖与营养 | 第23-28页 |
| ·下丘脑垂体性腺轴系统 | 第23-25页 |
| ·卵母细胞 | 第23-24页 |
| ·颗粒细胞 | 第24页 |
| ·雌二醇 | 第24-25页 |
| ·芳香化酶 | 第25页 |
| ·营养对后备母猪繁殖力的影响 | 第25-28页 |
| ·营养水平对后备母猪发情的影响 | 第25-26页 |
| ·营养水平对后备母猪卵母细胞质量的影响 | 第26-28页 |
| 2 microRNA与繁殖 | 第28-34页 |
| ·microRNA | 第28-31页 |
| ·miRNAs的生物合成 | 第29页 |
| ·miRNAs的作用方式 | 第29-30页 |
| ·miRNAs的表达特异性 | 第30页 |
| ·miRNAs的研究方法 | 第30-31页 |
| ·miRNAs在繁殖系统中的表达 | 第31-32页 |
| ·miRNAs在卵泡发育中的作用 | 第32页 |
| ·miRNAs调控卵巢体细胞功能 | 第32-33页 |
| ·miR-378 | 第33-34页 |
| 3 营养与microRNA | 第34-37页 |
| ·营养物质对miRNAs表达的影响 | 第34-36页 |
| ·营养水平对miRNAs表达的影响 | 第36-37页 |
| 第二部分 存在的问题及研究的目的、意义,内容和技术路线 | 第37-40页 |
| 1 存在的问题 | 第37页 |
| 2 本研究的目的、意义 | 第37-38页 |
| 3 研究内容 | 第38-39页 |
| 4 本研究技术路线 | 第39-40页 |
| 第三部分 试验研究 | 第40-125页 |
| 试验一 营养水平对后备母猪卵巢miR-378表达的影响 | 第40-48页 |
| 1 引言 | 第40页 |
| 2 材料与方法 | 第40-44页 |
| ·主要仪器设备 | 第40页 |
| ·主要试剂 | 第40页 |
| ·试验设计 | 第40-41页 |
| ·试验饲粮 | 第41页 |
| ·试验动物及场地 | 第41页 |
| ·饲养管理及发情鉴定 | 第41-42页 |
| ·样品采集 | 第42页 |
| ·总RNA的提取 | 第42页 |
| ·microRNA相对表达量的测定 | 第42-44页 |
| ·miScript反转录 | 第42-43页 |
| ·实时荧光定量PCR(Real-Time PCR)检测miRNA相对表达量 | 第43-44页 |
| ·数据分析 | 第44页 |
| 3 结果与分析 | 第44-47页 |
| ·营养水平影响后备母猪发情 | 第44页 |
| ·营养水平影响卵巢miR-378表达 | 第44-46页 |
| ·miR-378在颗粒细胞中的表达 | 第46-47页 |
| 4 讨论 | 第47页 |
| 5 小结 | 第47-48页 |
| 试验二 慢病毒介导的miR-378对猪颗粒细胞的影响 | 第48-93页 |
| 1 前言 | 第48页 |
| 2 材料与方法 | 第48-68页 |
| ·材料 | 第48-55页 |
| ·细菌、细胞 | 第48页 |
| ·主要仪器设备 | 第48-49页 |
| ·主要试剂 | 第49-52页 |
| ·主要试剂的配制 | 第52-55页 |
| ·方法 | 第55-68页 |
| ·重组miR-378质粒的构建 | 第55-58页 |
| ·重组miR-378慢病毒颗粒的制备及方法比较 | 第58-63页 |
| ·慢病毒介导的miR-378转导颗粒细胞 | 第63页 |
| ·细胞总RNA的提取 | 第63页 |
| ·microRNA相对表达量的测定 | 第63页 |
| ·特定基因表达的相对定量测定 | 第63-66页 |
| ·蛋白表达量的测定 | 第66-67页 |
| ·雌二醇浓度测定 | 第67-68页 |
| ·Capase 3分析 | 第68页 |
| ·数据分析 | 第68页 |
| 3 结果与分析 | 第68-88页 |
| ·重组miR-378质粒的构建 | 第68-72页 |
| ·重组miR-378质粒的构建 | 第68-70页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第70-71页 |
| ·重组质粒的测序 | 第71页 |
| ·重构后的miR-378结构 | 第71-72页 |
| ·细胞的生长特性 | 第72-73页 |
| ·HEK293FT细胞的生长特性 | 第72-73页 |
| ·猪颗粒细胞的生长特性 | 第73页 |
| ·miR-378慢病毒颗粒的制备 | 第73-74页 |
| ·脂质体共转染制备慢病毒颗粒 | 第73-74页 |
| ·磷酸钙沉共淀法制备慢病毒颗粒 | 第74页 |
| ·慢病毒滴度测定 | 第74-77页 |
| ·脂质体转染制得的病毒滴度 | 第74-76页 |
| ·磷酸钙共沉淀法制得的病毒 | 第76-77页 |
| ·不同方法生产的慢病毒转导颗粒细胞的比较 | 第77-79页 |
| ·脂质体转染制得的病毒 | 第77页 |
| ·磷酸钙共沉淀法制得的病毒 | 第77-79页 |
| ·慢病毒介导的miR-378过表达 | 第79页 |
| ·miR-378对颗粒细胞增殖的影响 | 第79-80页 |
| ·颗粒细胞各特定基因表达的普通PCR扩增 | 第80-81页 |
| ·miR-378对颗粒细胞基因表达的影响 | 第81-82页 |
| ·miR-378对颗粒细胞蛋白表达的影响 | 第82-86页 |
| ·miR-378对颗粒细胞FSHR表达的影响 | 第82-83页 |
| ·miR-378对颗粒细胞GDNF表达的影响 | 第83-84页 |
| ·miR-378对颗粒细胞MAPK表达的影响 | 第84-85页 |
| ·miR-378对颗粒细胞PGR表达的影响 | 第85-86页 |
| ·miR-378对颗粒细胞芳香化酶表达的影响 | 第86页 |
| ·miR-378对颗粒细胞雌二醇分泌的影响 | 第86-87页 |
| ·miR-378对颗粒细胞抗凋亡的影响 | 第87-88页 |
| 4 讨论 | 第88-92页 |
| ·克隆片段的设计 | 第88页 |
| ·克隆载体的选择 | 第88-89页 |
| ·慢病毒 | 第89-90页 |
| ·流式细胞术 | 第90页 |
| ·两种病毒制备方法比较 | 第90页 |
| ·miR-378对颗粒细胞的影响 | 第90-92页 |
| 5 小结 | 第92-93页 |
| 试验三 miR-378调控芳香化酶、孕酮受体表达的分子机制 | 第93-113页 |
| 1 前言 | 第93页 |
| 2 材料与方法 | 第93-102页 |
| ·材料 | 第93-95页 |
| ·细菌、细胞 | 第93页 |
| ·主要仪器设备 | 第93页 |
| ·主要试剂 | 第93-95页 |
| ·方法 | 第95-102页 |
| ·重组p-miR-Report质粒的构建 | 第95-98页 |
| ·重组p-miR-Repot质粒的点突变 | 第98-100页 |
| ·颗粒细胞的转染及双荧光素酶分析 | 第100-101页 |
| ·数据分析 | 第101-102页 |
| 3 结果与分析 | 第102-110页 |
| ·重组3’UTR荧光素酶质粒的构建 | 第102-104页 |
| ·重组3’UTR荧光素酶质粒的构建策略 | 第102页 |
| ·3’UTR产物的扩增 | 第102-103页 |
| ·重组3’UTR荧光素酶质粒的鉴定 | 第103-104页 |
| ·重组3’UTR荧光素酶质粒的测序鉴定 | 第104页 |
| ·突变3’UTR荧光素酶质粒的构建 | 第104-108页 |
| ·突变3’UTR荧光素酶质粒的构建策略 | 第104-105页 |
| ·突变3’UTR PCR产物A、B和C | 第105页 |
| ·突变3’UTR荧光素酶质粒的鉴定 | 第105-107页 |
| ·突变3’UTR荧光素酶质粒的测序鉴定 | 第107-108页 |
| ·孕酮受体3’UTR的荧光素酶分析 | 第108-109页 |
| ·芳香化酶3’UTR荧光素酶分析 | 第109-110页 |
| 4 讨论 | 第110-112页 |
| 5 小结 | 第112-113页 |
| 试验四 过表达芳香化酶3’UTR及miR-378抑制剂对颗粒细胞的影响 | 第113-125页 |
| 1 前言 | 第113页 |
| 2 材料与方法 | 第113-117页 |
| ·材料 | 第113-114页 |
| ·细胞 | 第113页 |
| ·主要仪器设备 | 第113页 |
| ·主要试剂 | 第113-114页 |
| ·方法 | 第114-117页 |
| ·过表达芳香化酶3’UTR质粒的构建 | 第114-115页 |
| ·颗粒细胞转染过表达芳香化酶3’UTR质粒 | 第115页 |
| ·颗粒细胞转染miR-378抑制剂 | 第115-116页 |
| ·3 ’UTR过表达检测 | 第116页 |
| ·miR-378表达检测 | 第116页 |
| ·荧光素酶分析 | 第116-117页 |
| ·蛋白电泳 | 第117页 |
| ·雌二醇的测定 | 第117页 |
| ·数据分析 | 第117页 |
| 3 结果与分析 | 第117-123页 |
| ·过表达3’UTR质粒的构建 | 第117-118页 |
| ·过表达3’UTR质粒的构建策略 | 第117页 |
| ·过表达3’UTR质粒的鉴定 | 第117-118页 |
| ·颗粒细胞过表达3’UTR质粒 | 第118-119页 |
| ·过表达3’UTR对颗粒细胞的影响 | 第119-120页 |
| ·过表达3’UTR对颗粒细胞芳香化酶表达的影响 | 第119-120页 |
| ·过表达3’UTR对颗粒细胞雌二醇分泌的影响 | 第120页 |
| ·miR-378抑制剂对颗粒细胞miR-378表达的影响 | 第120-121页 |
| ·miR-378抑制剂对颗粒细胞的影响 | 第121-122页 |
| ·miR-378抑制剂对颗粒细胞芳香化酶表达的影响 | 第121-122页 |
| ·miR-378抑制剂对颗粒细胞雌二醇分泌的影响 | 第122页 |
| ·miR-378抑制剂对荧光素酶活力的影响 | 第122-123页 |
| 4 讨论 | 第123-124页 |
| 5 小结 | 第124-125页 |
| 第四部分 总体讨论与结论 | 第125-128页 |
| 1 总体讨论 | 第125-127页 |
| 2 论文总体结论 | 第127页 |
| 3 本研究的创新点 | 第127页 |
| 4 有待进一步研究的问题 | 第127-128页 |
| 参考文献 | 第128-138页 |
| 附录 | 第138-147页 |
| 致谢 | 第147-149页 |
| 攻读学位期间发表的论文和科研参与情况 | 第149-150页 |
