| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-9页 |
| 缩略表语 | 第9-10页 |
| 1 前言 | 第10-24页 |
| ·炭疽病 | 第10页 |
| ·炭疽芽胞杆菌 | 第10-11页 |
| ·炭疽与生物战争 | 第11-12页 |
| ·炭疽致病机理 | 第12-15页 |
| ·荚膜 | 第13-14页 |
| ·炭疽毒素蛋白致死过程 | 第14-15页 |
| ·水肿因子 | 第15页 |
| ·保护性抗原(PROTECTIVE ANTIGEN) | 第15-18页 |
| ·致死因子(LETHAL FACTOR) | 第18-20页 |
| ·炭疽病防治 | 第20-23页 |
| ·炭疽病治疗 | 第20-21页 |
| ·炭疽疫苗 | 第21-23页 |
| ·研究目的与意义 | 第23-24页 |
| 2 炭疽保护性抗原可溶性表达纯化 | 第24-41页 |
| ·实验材料 | 第24-27页 |
| ·菌株和质粒 | 第24页 |
| ·主要药品及试剂 | 第24-25页 |
| ·主要培养基及其配制 | 第25页 |
| ·缓冲液: | 第25-26页 |
| ·仪器设备 | 第26-27页 |
| ·实验方法 | 第27-32页 |
| ·pag基因克隆 | 第27-29页 |
| ·PA基因的定点突变 | 第29-30页 |
| ·PA蛋白的诱导表达 | 第30-31页 |
| ·E.coli BL21-CodonPlus(DE3)-RIL电转化感受态细胞的制备 | 第30页 |
| ·电转化pGEX-pag和突变体质粒于BL21-CodonPlus(DE3)-RIL | 第30-31页 |
| ·诱导表达野生型和突变型pag基因表达 | 第31页 |
| ·PA及其突变体蛋白的纯化 | 第31页 |
| ·Western blot分析 | 第31-32页 |
| ·细胞毒性实验 | 第32页 |
| ·N435C显性抑制活性鉴定 | 第32页 |
| ·结果与分析 | 第32-39页 |
| ·重组表达质粒pGEX-pag构建 | 第32-34页 |
| ·PA突变体的构建 | 第34-35页 |
| ·PA诱导表达条件确定 | 第35-36页 |
| ·重组蛋白PA及其突变体的纯化 | 第36-37页 |
| ·活性检测 | 第37-38页 |
| ·显性抑制活性检测 | 第38-39页 |
| ·讨论 | 第39-41页 |
| 3 LF随机突变体库的构建及筛选 | 第41-53页 |
| ·实验材料、试剂 | 第41页 |
| ·实验方法 | 第41-44页 |
| ·LF表达质粒构建 | 第41-42页 |
| ·LF诱导表达 | 第42页 |
| ·随机突变体库构建 | 第42页 |
| ·T7噬菌体制备 | 第42-43页 |
| ·突变体文库筛选 | 第43页 |
| ·LF及其突变体蛋白纯化 | 第43页 |
| ·Western blot分析 | 第43页 |
| ·体外细胞活性检测 | 第43-44页 |
| ·竞争抑制实验 | 第44页 |
| ·结果与分析 | 第44-51页 |
| ·表达质粒构建 | 第44-46页 |
| ·LF诱导条件确定 | 第46-47页 |
| ·突变体初筛结果 | 第47-48页 |
| ·LF及其单点突变体蛋白纯化 | 第48-49页 |
| ·LF单点突变体活性鉴定 | 第49-50页 |
| ·竞争抑制实验 | 第50-51页 |
| ·讨论 | 第51-53页 |
| 参考文献 | 第53-59页 |
| 致谢 | 第59-60页 |
| 附录 | 第60页 |
