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猪干扰素诱导蛋白BST-2克隆、表达及生物学活性检测

中文摘要第1-10页
Abstract第10-12页
1 前言第12-30页
   ·BST-2 蛋白第13-18页
     ·BST-2 蛋白的发现第13页
     ·BST-2 的研究现状:第13-18页
       ·BST-2 基因:第13页
       ·BST-2 分子结构:第13-14页
       ·BST-2 的表达:第14-15页
       ·BST-2 抗病毒机制:第15-16页
       ·BST-2 的其它特征:第16-18页
       ·BST-2 研究前景:第18页
   ·禽流感第18-24页
     ·禽流感病毒病原学特征第19页
     ·禽流感流行病学第19-20页
     ·禽流感的流行状况第20-21页
     ·禽流感跨种间传播第21-23页
     ·H9N2 禽流感病毒基因的演化第23-24页
   ·猪繁殖与呼吸综合症第24-27页
     ·猪繁殖与呼吸综合症病毒病原学特征第24-25页
     ·猪繁殖与呼吸综合症病毒基因结构第25页
     ·猪繁殖与呼吸综合症防治措施第25页
     ·猪繁殖与呼吸综合症免疫治疗法第25-27页
   ·水泡性口炎病毒第27-30页
     ·水泡性口炎病毒病原学特征第27-28页
     ·水泡性口炎流行病学第28页
     ·水泡性口炎病毒的应用第28-29页
     ·水泡性口炎病毒的检测第29-30页
2 材料与方法第30-48页
   ·试验材料第30-34页
     ·菌株、病毒、细胞第30页
     ·载体第30页
     ·实验动物第30页
     ·实验试剂及耗材第30页
     ·试验所用溶液及其配制第30-33页
     ·主要仪器第33-34页
   ·试验方法第34-48页
     ·BST-2 基因的克隆第34-36页
       ·设计引物第34页
       ·BST-2 蛋白的诱导第34页
       ·样品的 RNA 提取第34-35页
       ·BST-2 基因的 RT-PCR 扩增第35-36页
       ·BST-2 基因片段 PCR 产物的纯化回收第36页
     ·目的基因的连接、转化及鉴定第36-40页
       ·目的基因与 pMD18-T 载体的连接体系第36-37页
       ·大肠杆菌感受态细胞的制备:第37页
       ·连接产物转化第37页
       ·重组质粒 DNA 的提取第37-38页
       ·重组质粒的鉴定第38-39页
       ·阳性克隆序列测序第39页
       ·BST-2 基因片段的回收第39页
       ·重组 pcDNA3.1-BST-2 质粒的构建及鉴定第39-40页
     ·BST-2 蛋白的表达第40-43页
       ·重组 pcDNA3.1-BST-2 质粒转染 HEK293T 细胞第40-41页
       ·IFA 检测猪重组 BST-2 蛋白的瞬时表达第41页
       ·融合蛋白的纯化第41页
       ·BST-2 蛋白浓度的测定第41-42页
       ·纯化后的的重组 BST-2 蛋白的 SDS-PAGE 鉴定第42-43页
       ·纯化后的的重组 BST-2 蛋白的 Western blot 鉴定第43页
     ·生物学活性的检测第43-48页
       ·微量细胞病变抑制法测定抗病毒活性:第43-44页
       ·CCK-8 测定细胞存活第44页
       ·禽流感病毒增殖抑制实验第44-45页
       ·BST-2 协同干扰素抗病毒活性的测定第45页
       ·中和试验第45-48页
         ·重组 BST-2 蛋白免疫小鼠第45-46页
         ·检测三免后血清抗体效价第46-47页
         ·活性测定第47-48页
3 结果第48-56页
   ·BST-2 基因的 RT-PCR 扩增第48页
   ·重组质粒 PCDNA-BST-2 的构建与鉴定第48-49页
   ·重组质粒 PCDNA-BST-2 瞬时表达的检测第49页
   ·重组 BST-2 蛋白的提取及鉴定第49-50页
   ·生物学活性鉴定第50-56页
     ·抗病毒功能检测第50-52页
     ·CCK-8 检测 BST-2 抗病毒功能第52页
     ·BST-2 对鸡胚中禽流感病毒增殖抑制实第52-53页
     ·BST-2 协同干扰素抗病毒活性第53-54页
     ·中和试验第54-56页
4 讨论第56-58页
5 结论第58-59页
参考文献第59-70页
附录第70-71页
致谢第71-72页
研究生期间发表论文第72页

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