| 符号说明 | 第1-10页 |
| 中文摘要 | 第10-12页 |
| Abstract | 第12-14页 |
| 1 前言 | 第14-25页 |
| ·猪链球菌 2 型的概况 | 第14-15页 |
| ·猪链球菌 SLY、EF 的研究进展 | 第15-18页 |
| ·溶血素（suilysin，SLY）的研究进展 | 第15-17页 |
| ·胞外蛋白因子（extracellular protein factor，EF）的研究进展 | 第17-18页 |
| ·猪链球菌致病机理的研究进展 | 第18-21页 |
| ·猪链球菌 2 型疫苗的研究进展 | 第21-22页 |
| ·弱毒活菌苗 | 第21页 |
| ·灭活苗 | 第21页 |
| ·基因工程亚单位疫苗 | 第21-22页 |
| ·流感病毒与猪链球菌 2 型的共感染 | 第22-25页 |
| ·流感病毒 HA 的结构功能与致病力的关系 | 第22-23页 |
| ·流感病毒 HA 裂解有关的蛋白酶 | 第23-24页 |
| ·猪链球菌 2 型对流感病毒致病力的作用 | 第24-25页 |
| 2 材料与方法 | 第25-40页 |
| ·实验用试剂与耗材 | 第25页 |
| ·菌株与载体 | 第25页 |
| ·细胞培养试剂与耗材 | 第25页 |
| ·基因操作试剂盒 | 第25页 |
| ·ELISA 试剂与耗材 | 第25页 |
| ·其他试剂与耗材 | 第25页 |
| ·试验用溶液的配制 | 第25-29页 |
| ·蛋白表达与纯化用溶液的配置 | 第25-27页 |
| ·SLY 溶血活性分析用溶液的配置 | 第27-28页 |
| ·ELISA 用溶液的配置 | 第28页 |
| ·细胞培养用溶液的配置 | 第28-29页 |
| ·主要仪器 | 第29页 |
| ·猪链球菌 2 型 SLY 和 EF 的原核表达 | 第29-35页 |
| ·DNA 的提取 | 第29-30页 |
| ·引物设计与 PCR 扩增 | 第30页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第30-31页 |
| ·基因的克隆、阳性克隆筛选 | 第31-32页 |
| ·SLY 与 EF 基因回收 | 第31页 |
| ·SLY 与 EF 基因与 T 载体的连接 | 第31页 |
| ·重组质粒的提取 | 第31-32页 |
| ·表达载体的构建 | 第32页 |
| ·重组蛋白表达条件优化 | 第32-33页 |
| ·IPTG 浓度对蛋白表达的影响 | 第32-33页 |
| ·诱导时间对蛋白表达的影响 | 第33页 |
| ·诱导温度对蛋白表达的影响 | 第33页 |
| ·SDS-PAGE | 第33-34页 |
| ·蛋白表达与纯化 | 第34-35页 |
| ·可溶性蛋白的制备 | 第34页 |
| ·蛋白的纯化 | 第34-35页 |
| ·纯化 rSLY 与 rEF 蛋白的透析 | 第35页 |
| ·蛋白标准曲线的绘制 | 第35页 |
| ·猪链球菌 2 型溶血素溶血活性研究 | 第35-36页 |
| ·rSLY 溶血活性鉴定 | 第35-36页 |
| ·溶血实验 | 第35-36页 |
| ·rSLY 的溶血效价测定 | 第36页 |
| ·溶血谱测定 | 第36页 |
| ·rSLY 的稳定性分析 | 第36页 |
| ·保存温度对 rSLY 稳定性的影响 | 第36页 |
| ·pH 对 rSLY 稳定性的影响 | 第36页 |
| ·离子强度对 rSLY 稳定性的影响 | 第36页 |
| ·链球菌 2 型 SLY 与 EF 蛋白亚单位疫苗研制及其免疫效力评价 | 第36-38页 |
| ·亚单位疫苗的制备与免疫 | 第37页 |
| ·抗血清的制备 | 第37页 |
| ·间接 ELISA 方法的建立 | 第37-38页 |
| ·抗原、二抗和血清最佳浓度确定 | 第37页 |
| ·抗体效价测定 | 第37-38页 |
| ·rSLY 与 rEF 对猪流感病毒感染能力的影响 | 第38-40页 |
| ·MDCK 细胞的培养方法 | 第38-39页 |
| ·细胞的复苏 | 第38页 |
| ·细胞的冻存 | 第38页 |
| ·细胞的传代与培养 | 第38-39页 |
| ·rSLY 与 rEF 对细胞毒性的影响 | 第39页 |
| ·SLY 与 EF 对病毒感染细胞的作用 | 第39页 |
| ·细胞上清血凝价的测定 | 第39-40页 |
| 3 实验结果 | 第40-50页 |
| ·SLY 和 EF 的克隆与表达 | 第40-43页 |
| ·SLY 与 EF 全长基因的扩增 | 第40页 |
| ·重组表达质粒的构建与鉴定 | 第40-41页 |
| ·重组 SLY 与 EF 蛋白表达条件优化 | 第41页 |
| ·rSLY 与 rEF 的诱导表达与纯化 | 第41-43页 |
| ·蛋白标准曲线的绘制 | 第43页 |
| ·猪链球菌 2 型溶血素溶血活性分析 | 第43-46页 |
| ·溶血试验 | 第43-44页 |
| ·rSLY 的溶血谱 | 第44页 |
| ·rSLY 的稳定性分析 | 第44-46页 |
| ·保存温度对 rSLY 稳定性的影响 | 第44-45页 |
| ·pH 对 rSLY 稳定性的影响 | 第45页 |
| ·离子强度对 rSLY 稳定性的影响 | 第45-46页 |
| ·链球菌 2 型 SLY 与 EF 蛋白亚单位疫苗研制及其免疫效力评价 | 第46-47页 |
| ·ELISA 试验最佳条件 | 第46页 |
| ·免疫血清检测 | 第46-47页 |
| ·rSLY 与 rEF 对流感病毒毒力的影响 | 第47-50页 |
| ·SLY 与 EF 的细胞毒性 | 第47-48页 |
| ·SLY 与 EF 与流感病毒共同作用 | 第48-50页 |
| 4. 讨论 | 第50-53页 |
| 5. 结论 | 第53-54页 |
| ·链球菌 2 型 SLY、EF 的原核表达及 SLY 生物学活性分析 | 第53页 |
| ·链球菌 2 型 SLY 与 EF 蛋白亚单位疫苗研制及其免疫效力评价 | 第53页 |
| ·猪链球菌 2 型 SLY 与 EF 蛋白增强猪流感病毒毒力研究 | 第53-54页 |
| 创新之处 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-66页 |
| 致谢 | 第66-67页 |
| 攻读硕士学位期间发表、录用（或起草）论文 | 第67页 |
