| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 缩略语表 | 第9-11页 |
| 1 前言 | 第11-24页 |
| ·古菌 | 第11-13页 |
| ·硫化叶菌 | 第13-15页 |
| ·古菌启动子的主要元件 | 第15页 |
| ·古菌RNA聚合酶 | 第15-17页 |
| ·古菌通用转录因子 | 第17-20页 |
| ·古菌遗传操作体系 | 第20-22页 |
| ·蛋白跨膜转运与蛋白质耐热性改造 | 第22页 |
| ·研究目的及内容 | 第22-24页 |
| 2 材料与方法 | 第24-39页 |
| ·实验材料 | 第24-28页 |
| ·菌株和质粒 | 第24页 |
| ·培养基成分及培养条件 | 第24-27页 |
| ·主要分子生物学试剂和由公司完成的实验 | 第27页 |
| ·主要仪器 | 第27-28页 |
| ·实验方法及原理 | 第28-39页 |
| ·大肠杆菌DH5a感受态制备和热激转化法 | 第28页 |
| ·硫化叶菌感受态的制备和电击转化法 | 第28-30页 |
| ·提取硫化叶菌总DNA | 第30页 |
| ·硫化叶菌RNAP和GTFs表达载体的构建 | 第30-32页 |
| ·RNAP和GTFs的表达与纯化 | 第32-33页 |
| ·包涵体蛋白的复性纯化 | 第33页 |
| ·SDS-PAGE和Western Blot | 第33-34页 |
| ·电泳迁移率变动实验(EMSAs) | 第34-35页 |
| ·双宿主表达载体pT7SH的构建 | 第35-36页 |
| ·硫化叶菌ssb基因启动子缺失突变报告质粒的构建 | 第36-37页 |
| ·β-Galactosidase(LacS)酶活分析 | 第37-38页 |
| ·MALDI-TOF鉴定 | 第38页 |
| ·跨膜转运表达载体和报告质粒的构建 | 第38-39页 |
| 3 结果与分析 | 第39-60页 |
| ·古菌RNA聚合酶组装及T6BRE/araS启动子元件分析 | 第39-51页 |
| ·基本转录因子(GTFs)的表达纯化 | 第39-44页 |
| ·TBP的表达纯化 | 第39-43页 |
| ·TFB1的表达纯化 | 第43-44页 |
| ·RNA聚合酶亚基同源表达及互作分析 | 第44-49页 |
| ·RNAP复合体纯化 | 第44-48页 |
| ·RNA聚合酶亚基间相互作用的分析 | 第48-49页 |
| ·GTFs和RNAP与硫化叶菌启动子序列互作分析 | 第49-51页 |
| ·嗜热古菌表达载体的改进及ssb基因启动子的分析 | 第51-56页 |
| ·串联纯化标签表达载体的改进及应用 | 第51-53页 |
| ·双宿主表达载体的构建 | 第53-54页 |
| ·ssb启动子突变株的电转化及菌株酶活测定 | 第54-56页 |
| ·利用嗜热古菌表达系统改造酶的耐热特性 | 第56-60页 |
| ·跨膜转运表达载体的构建 | 第56页 |
| ·lacS基因为报告基因验证该系统的可行性 | 第56-60页 |
| 4 讨论 | 第60-64页 |
| ·古菌RNA聚合酶组装及T6BRE/araS启动子元件分析 | 第60-61页 |
| ·嗜热古菌表达载体的改进及ssb基因启动子的分析 | 第61-63页 |
| ·利用嗜热古菌表达系统改造酶的耐热特性 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-69页 |
| 附录 | 第69-71页 |
| 致谢 | 第71页 |
