| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-11页 |
| 目录 | 第11-14页 |
| 1 前言 | 第14-28页 |
| ·溶瘤腺病毒在肿瘤基因治疗中的研究进展 | 第15-20页 |
| ·肿瘤基因治疗 | 第15-16页 |
| ·基因治疗的病毒载体 | 第16-18页 |
| ·溶瘤腺病毒 | 第18-20页 |
| ·内源性启动子调控腺病毒 | 第19页 |
| ·基因突变调控溶瘤腺病毒 | 第19页 |
| ·对腺病毒外壳蛋白进行修饰 | 第19-20页 |
| ·RNA 干扰 | 第20-24页 |
| ·RNA 干扰现象的发现 | 第20-21页 |
| ·RNA 干扰的沉默机制 | 第21-22页 |
| ·RNAi 现象的重要特征 | 第22页 |
| ·RNAi 在生物医学领域的应用 | 第22-24页 |
| ·RNAi 在研究基因功能的新工具 | 第22-23页 |
| ·RNAi 用于病毒性疾病的治疗 | 第23页 |
| ·RNAi 对肿瘤的治疗 | 第23-24页 |
| ·shRNA 在 RNAi 的应用 | 第24页 |
| ·Bmi-1 基因 | 第24-26页 |
| ·Bmi-1 基因和蛋白的生物学特征 | 第24-25页 |
| ·Bmi-1 在干细胞和肿瘤干细胞中的作用 | 第25页 |
| ·Bmi-1 在恶性肿瘤细胞中的作用 | 第25-26页 |
| ·实验方案设计 | 第26-28页 |
| ·课题来源 | 第26页 |
| ·实验目的和意义 | 第26页 |
| ·构建双靶向嵌合型溶瘤腺病毒的实验思路 | 第26-28页 |
| ·学位论文的创新点、重点、难点及关键问题 | 第28页 |
| 2 实验材料与方法 | 第28-46页 |
| ·实验材料 | 第28-31页 |
| ·生化试剂 | 第28-29页 |
| ·培养基及细胞培养液 | 第29页 |
| ·细胞株系及培养条件 | 第29-30页 |
| ·主要仪器与设备 | 第30-31页 |
| ·实验过程 | 第31-46页 |
| ·pCN205-11zf-Bmi-1-shRNA 质粒的构建 | 第31-38页 |
| ·Bmi-1-shRNA 片段的制备 | 第31-32页 |
| ·Bmi-1-shRNA 片段与载体 PMD-18T 的连接 | 第32-33页 |
| ·Bmi-1-shRNA 片段克隆到穿梭质粒pCN203 | 第33-34页 |
| ·pCN203203-Bmi-1-shRNA 片段与骨架质粒 pCN3602 的连接 | 第34-35页 |
| ·pCN204-Bmi-1-shRNA 与pCN103-11zf 的同源重组 | 第35-38页 |
| ·重组质粒pCN205-11zf-Bmi-1-shRNA 的病毒包装 | 第38-39页 |
| ·腺病毒的小量扩增与鉴定 | 第39-40页 |
| ·腺病毒大量制备与CsCl 梯度离心纯化病毒 | 第40-41页 |
| ·腺病毒滴度测定 | 第41页 |
| ·MTT 法检测细胞存活率 | 第41-42页 |
| ·目的病毒在白血病细胞复制能力的测定(子代复制能力) | 第42页 |
| ·Western blot 检测蛋白的表达水平 | 第42-45页 |
| ·光学显微镜观察细胞形态变化（Hoechst33342 荧光检测） | 第45-46页 |
| ·溶瘤腺病毒Ad205-F11-Bmi-1-shRNA 体内抗白血病的研究 | 第46页 |
| 3 实验结果与分析 | 第46-56页 |
| ·载体构建结果 | 第46-50页 |
| ·Bmi-1-shRNA 目的基因的鉴定结果 | 第46-47页 |
| ·PMD-18T-Bmi-1-shRNA 的鉴定结果 | 第47-48页 |
| ·pCN203-Bmi-1-shRNA 的鉴定结果 | 第48页 |
| ·pCN04-Bmi-1-shRNA 的鉴定结果 | 第48-49页 |
| ·pCN205-Bmi-1-shRNA 的鉴定结果 | 第49-50页 |
| ·病毒包装鉴定 | 第50-51页 |
| ·细胞实验结果 | 第51-54页 |
| ·病毒制备及滴度测定 | 第51页 |
| ·目的病毒在体外对不同细胞的活力的影响(MTT 法检测细胞存活率) | 第51-52页 |
| ·子代复制能力实验显示 Ad5/F11 在白血病细胞中有较高的复制能力 | 第52-53页 |
| ·目的病毒对不同细胞中 Bmi-1 蛋白的抑制结果 | 第53-54页 |
| ·光学显微镜观察形态变化(Hoechst33342 荧光检测) | 第54页 |
| ·目的病毒对白血病移植瘤体内实验的研究治疗 | 第54-56页 |
| 4 讨论 | 第56-59页 |
| 5 结论 | 第59-60页 |
| 6 参考文献 | 第60-64页 |
