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番茄叶绿体ω-3脂肪酸去饱和酶基因(LeFAD7)的克隆及其在温度逆境下的功能分析

英文缩略表第1-13页
中文摘要第13-16页
英文摘要第16-21页
1. 引言第21-36页
   ·温度对植物光合作用的影响第21-23页
     ·低温对植物光合作用的影响第21-22页
     ·高温对植物光合作用的影响第22-23页
   ·温度对植物生物膜的影响第23-26页
     ·植物生物膜的组成第23-24页
     ·低温对植物生物膜的影响第24-25页
     ·高温对植物生物膜的影响第25-26页
   ·多不饱和脂肪酸的合成第26-29页
     ·多不饱和脂肪酸的种类第26-27页
     ·多不饱和脂肪酸的生物合成第27-29页
   ·PUFAs 尤其是 ALA 合成过程中相关酶的研究第29-34页
     ·除ALA 外的PUFAs 合成过程中相关酶的研究第30-31页
     ·ALA 合成过程中关键酶(ω-3 脂肪酸去饱和酶)的研究第31-34页
   ·本研究的目的、意义第34-36页
2. 材料与方法第36-56页
   ·试验材料与处理第36-37页
     ·植物材料第36页
     ·材料处理第36页
     ·菌株与质粒第36页
     ·酶及生化试剂第36-37页
     ·PCR 引物第37页
   ·试验方法第37-51页
     ·利用TRIZOL试剂盒提取RNA第37-38页
     ·RNA 反转录第38-39页
     ·番茄叶绿体ω-3 脂肪酸去饱和酶基因全长的克隆第39-41页
     ·番茄ω-3去饱和酶基因的克隆及测序第41-44页
     ·Northern 杂交第44-45页
     ·Southern 杂交第45-46页
     ·表达载体的构建第46-48页
     ·电泳目的基因片段的回收第48-49页
     ·根癌农杆菌LBA4404感受态细胞的制备及转化第49-50页
     ·转基因番茄植株的 PCR 检测第50-51页
   ·转基因番茄生理指标的测定第51-56页
     ·转基因番茄叶片膜脂含量的测定方法第51-53页
     ·光合气体交换参数的测定第53页
     ·放氧活性的测定第53页
     ·荧光参数测定第53-54页
     ·P700 的820 nm 光吸收第54页
     ·活性氧清除酶的活性测定第54-55页
     ·可溶性蛋白的测定第55页
     ·叶片电导率的测定第55页
     ·丙二醛(MDA)含量的测定第55页
     ·花粉活性的测定第55页
     ·扫描电镜样品的制作与观察第55-56页
3. 结果与分析第56-93页
   ·LeFAD7基因的克隆第56-60页
     ·番茄叶片RNA的提取及反转录第56页
     ·基因中间片段的克隆第56-57页
     ·番茄ω-3 脂肪酸去饱和酶基因3' 端的克隆第57页
     ·番茄ω-3 脂肪酸去饱和酶基因5' 端的克隆第57-58页
     ·番茄ω-3脂肪酸去饱和酶基因全长的克隆第58-60页
   ·番茄ω-3脂肪酸去饱和酶基因特性分析第60-67页
     ·基因序列同源性分析第60-65页
     ·LeFAD7基因编码蛋白的生化特性分析第65-67页
   ·LeFAD7 基因表达特性分析第67-70页
     ·LeFAD7 基因Southern 杂交分析第67-68页
     ·LeFAD7 基因Northern 杂交分析第68-70页
   ·LeFAD7 基因转化番茄第70-73页
     ·正、反义表达载体的构建第70页
     ·正、反义克隆载体的鉴定第70-72页
     ·正、反义表达载体的检测第72页
     ·质粒 PBIHFAD(+)和 PBIHFAD(-)转化农杆菌第72-73页
     ·LeFAD7 基因在番茄中的遗传转化第73页
   ·转反义LeFAD7 基因植株的鉴定与功能分析第73-84页
     ·转反义LeFAD7 基因植株的分子检测第73-74页
     ·抑制LeFAD7 基因表达改变类囊体膜脂的组成第74-76页
     ·抑制LeFAD7 基因表达对高温胁迫下叶片光合速率的影响第76-77页
     ·抑制LeFAD7 基因表达增加高温胁迫下植株的生长量第77-78页
     ·高温胁迫下抑制LeFAD7 基因表达对番茄放氧活性的影响第78页
     ·抑制 LeFAD7 基因表达减轻高温胁迫下 PSⅡ光抑制第78-79页
     ·高温胁迫对番茄叶片相对电导率的影响第79-80页
     ·高温胁迫对番茄叶片对番茄叶片叶绿素含量及叶绿体超微结构的影响第80-81页
     ·高温胁迫对番茄叶片可溶性蛋白含量的影响第81-82页
     ·高温胁迫对番茄叶片活性氧清除酶活性的影响第82-83页
     ·高温胁迫对番茄叶片 MDA 含量的影响第83页
     ·抑制 LeFAD7 基因表达降低花粉活性第83页
     ·抑制基因表达对番茄果型的影响第83-84页
   ·LeFAD7 基因在番茄中过量表达后转基因植株的鉴定第84-93页
     ·LeFAD7 基因在番茄中过量表达后转基因植株的分子检测第84-85页
     ·LeFAD7 基因在番茄中过量表达后改变番茄叶片类囊体膜脂的组成第85-87页
     ·低温弱光胁迫下过量表达LeFAD7 基因对番茄叶片放氧活性的影响第87页
     ·过量表达 LeFAD7 基因减轻低温弱光胁迫下 PSⅠ的光抑制第87-88页
     ·过量表达 LeFAD7 基因减轻低温弱光胁迫下番茄叶片 PSⅡ的光抑制第88-89页
     ·低温弱光胁迫对番茄叶片相对电导率的影响第89-90页
     ·低温胁迫对番茄叶片叶绿素含量及叶绿体超微结构的影响第90-91页
     ·低温弱光胁迫对番茄叶片可溶性蛋白含量的影响第91页
     ·低温弱光胁迫对番茄叶片活性氧清除酶活性的影响第91-92页
     ·低温弱光胁迫对番茄叶片 MDA 含量的影响第92-93页
4. 讨论第93-99页
   ·LeFAD7 基因序列特征分析第94-95页
   ·膜脂组成与植物抗逆性第95-99页
     ·抑制 LeFAD7 基因表达与植株耐热性第95-97页
     ·过量表达 LeFAD7 基因与植株耐冷性第97-99页
5. 对进一步研究的建议第99页
6. 结论第99-101页
7. 参考文献第101-119页
8. 附录第119-126页
 附录1第119-122页
 附录2第122-123页
 附录3第123-124页
 附录4第124-125页
 附录5第125-126页
9. 致谢第126-127页
10. 攻读博士学位期间已发表和待发表论文情况附录第127页

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