| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-13页 |
| 第一章 引言 | 第13-18页 |
| ·FAD 依赖的葡萄糖脱氢酶简介 | 第13-14页 |
| ·葡萄糖脱氢酶的分类及来源 | 第13页 |
| ·FAD 依赖的葡萄糖脱氢酶发展历程 | 第13-14页 |
| ·FAD 依赖葡萄糖脱氢酶的生理功能 | 第14页 |
| ·FAD 依赖葡萄糖脱氢酶的应用 | 第14-16页 |
| ·生物燃料电池 | 第14-15页 |
| ·酶生物传感器 | 第15-16页 |
| ·辅酶的再生 | 第16页 |
| ·依赖 FAD 的葡萄糖脱氢酶和葡萄糖氧化酶异同点 | 第16-17页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第17-18页 |
| 第二章 产 FAD 依赖葡萄糖脱氢酶菌株的筛选和鉴定 | 第18-26页 |
| ·实验材料 | 第18-19页 |
| ·土样、菌株和质粒 | 第18页 |
| ·培养基及主要溶液的配制 | 第18页 |
| ·引物合成 | 第18-19页 |
| ·工具酶、试剂盒和生化试剂 | 第19页 |
| ·主要仪器 | 第19页 |
| ·实验方法 | 第19-22页 |
| ·产 FADGDH 菌株的筛选 | 第19页 |
| ·丝状真菌基因组 DNA 的提取 | 第19-20页 |
| ·大肠杆菌 JM109 热激感受态的制备 | 第20页 |
| ·真菌菌株种属鉴定 | 第20-22页 |
| ·结果 | 第22-25页 |
| ·产 FADGDH 阳性菌株筛选 | 第22-23页 |
| ·菌株鉴定 | 第23-25页 |
| ·讨论 | 第25页 |
| 本章小结 | 第25-26页 |
| 第三章 FAD 依赖葡萄糖脱氢酶基因的克隆 | 第26-43页 |
| ·实验材料 | 第26-28页 |
| ·菌株和质粒 | 第26页 |
| ·培养基及主要溶液的配制 | 第26页 |
| ·引物合成 | 第26页 |
| ·工具酶、试剂盒和生化试剂 | 第26页 |
| ·主要仪器 | 第26-27页 |
| ·本章所用引物序列 | 第27页 |
| ·本章所构建的主要载体 | 第27-28页 |
| ·实验方法 | 第28-33页 |
| ·FAD 依赖葡萄糖脱氢酶基因克隆简并引物的设计 | 第28页 |
| ·FAD 依赖葡萄糖脱氢酶保守区核酸序列的克隆 | 第28-29页 |
| ·FAD 依赖葡萄糖脱氢酶全长序列的克隆 | 第29-31页 |
| ·FAD 依赖葡萄糖脱氢酶完整基因 cDNA 序列的克隆 | 第31-33页 |
| ·FAD 依赖葡萄糖脱氢酶 cDNA 序列分析 | 第33页 |
| ·结果 | 第33-42页 |
| ·FAD 依赖葡萄糖脱氢酶氨基酸序列的比对及保守区简并引物的设计 | 第33-36页 |
| ·FAD 依赖葡萄糖脱氢酶序列的克隆 | 第36-37页 |
| ·FAD 依赖葡萄糖脱氢酶 cDNA 序列 gdhz1 的克隆 | 第37页 |
| ·FAD 依赖葡萄糖脱氢酶基因 gdhz1 序列分析和相似性比较 | 第37-42页 |
| ·讨论 | 第42页 |
| 本章小结 | 第42-43页 |
| 第四章 FAD 依赖葡萄糖脱氢酶的表达及性质分析 | 第43-61页 |
| ·实验材料 | 第43-44页 |
| ·菌株和质粒 | 第43页 |
| ·培养基及主要溶液的配制 | 第43页 |
| ·引物合成 | 第43页 |
| ·工具酶、试剂盒和生化试剂 | 第43-44页 |
| ·主要仪器 | 第44页 |
| ·实验方法 | 第44-52页 |
| ·去除信号肽基因的获得 | 第44-45页 |
| ·FAD 依赖葡萄糖脱氢酶酶活测定方法 | 第45-46页 |
| ·表达载体的构建 | 第46-49页 |
| ·重组表达大肠杆菌的转化和诱导表达 | 第49页 |
| ·包涵体的变性和复性 | 第49-50页 |
| ·毕赤酵母重组子的构建 | 第50-51页 |
| ·毕赤酵母重组子的筛选 | 第51页 |
| ·FAD 依赖葡萄糖脱氢酶酶学性质分析 | 第51-52页 |
| ·结果 | 第52-59页 |
| ·去除信号肽基因的获得 | 第52页 |
| ·FAD 依赖葡萄糖脱氢酶测定酶活标准曲线 | 第52-53页 |
| ·重组表达载体的构建 | 第53-54页 |
| ·原核表达系统中目的蛋白的诱导表达 | 第54-55页 |
| ·包涵体的变性和复性 | 第55页 |
| ·gdhns 基因在毕赤酵母中的表达 | 第55-56页 |
| ·FAD 依赖葡萄糖脱氢酶的酶学性质 | 第56-59页 |
| ·讨论 | 第59-60页 |
| 本章小结 | 第60-61页 |
| 第五章 全文结论 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-68页 |
| 致谢 | 第68-69页 |
| 作者简历 | 第69页 |
