| 摘要 | 第1-9页 |
| ABSTRACT | 第9-11页 |
| 第一章 前言 | 第11-24页 |
| 1 菠萝蛋白酶的来源和组成 | 第11-12页 |
| ·果酶 | 第11页 |
| ·茎酶 | 第11-12页 |
| 2 菠萝蛋白酶的理化性质 | 第12-13页 |
| 3 影响菠萝蛋白酶稳定性的因素 | 第13-14页 |
| ·温度对菠萝蛋白酶活性的影响 | 第13页 |
| ·pH 对菠萝蛋白酶活性的影响 | 第13页 |
| ·金属离子对菠萝蛋白酶活性的影响 | 第13页 |
| ·其它因素对菠萝蛋白酶活性的影响 | 第13-14页 |
| 4 菠萝蛋白酶的药理作用研究进展 | 第14-17页 |
| ·抗炎作用 | 第14-15页 |
| ·免疫调节作用 | 第15页 |
| ·用于防治胃肠炎和消化不良疾病 | 第15-16页 |
| ·抗肿瘤作用 | 第16-17页 |
| ·改善心血管循环系统 | 第17页 |
| ·其它作用 | 第17页 |
| 5 菠萝蛋白酶的提取制备方法 | 第17-20页 |
| ·沉淀法 | 第17-18页 |
| ·离子交换色谱法 | 第18页 |
| ·固定化金属离子亲和色谱法 | 第18页 |
| ·超滤法 | 第18-19页 |
| ·双水相萃取法 | 第19页 |
| ·反胶团萃取法 | 第19-20页 |
| 6 菠萝蛋白酶的稳定性研究 | 第20-21页 |
| 7 菠萝蛋白酶在畜禽业生产中的应用研究 | 第21-22页 |
| ·在单胃动物生产中的应用 | 第21-22页 |
| ·在禽类生产中的应用 | 第22页 |
| ·在反刍动物中的应用 | 第22页 |
| 8 菠萝蛋白酶应用研究存在的问题及注意事项 | 第22页 |
| 9 本课题研究的目的和意义 | 第22-24页 |
| 第二章 菠萝蛋白酶的分离纯化 | 第24-34页 |
| 1 材料 | 第24-25页 |
| ·原材料 | 第24页 |
| ·试剂 | 第24页 |
| ·仪器 | 第24-25页 |
| ·试剂的配制 | 第25页 |
| 2 方法 | 第25-30页 |
| ·澄清菠萝皮汁的制备 | 第25页 |
| ·硫酸铵分级沉淀 | 第25-26页 |
| ·透析除硫酸铵 | 第26页 |
| ·CM Sepharose FF 凝胶柱纯化 | 第26-28页 |
| ·离子交换介质处理与转型 | 第27页 |
| ·装柱与平衡 | 第27页 |
| ·加样 | 第27页 |
| ·洗脱 | 第27-28页 |
| ·收集与活性测定 | 第28页 |
| ·菠萝蛋白酶纯化指标的计算 | 第28页 |
| ·酶蛋白浓度的测定 | 第28页 |
| ·酶活性的测定 | 第28-29页 |
| ·菠萝蛋白酶活力的测定方法 | 第28-29页 |
| ·酶活力计算公式 | 第29页 |
| ·透析除氯化钠 | 第29-30页 |
| ·冷冻真空干燥 | 第30页 |
| 3 结果 | 第30-32页 |
| ·标准蛋白曲线绘制 | 第30页 |
| ·每步纯化的过程及纯化效果 | 第30-31页 |
| ·菠萝蛋白酶CM Sepharose FF 柱纯化 | 第31-32页 |
| 4 分析与讨论 | 第32-33页 |
| 5 小结 | 第33-34页 |
| 第三章 菠萝蛋白酶鉴定及其性质研究 | 第34-47页 |
| 1 材料 | 第34-35页 |
| ·试剂 | 第34页 |
| ·仪器 | 第34-35页 |
| 2 方法 | 第35-39页 |
| ·酶的紫外吸收光谱 | 第35页 |
| ·分子量的测定 | 第35-38页 |
| ·凝胶储备液的制备 | 第35-36页 |
| ·蛋白质样品的处理 | 第36页 |
| ·凝胶制备 | 第36页 |
| ·操作方法 | 第36-38页 |
| ·不同温度对菠萝蛋白酶活性影响的测定 | 第38页 |
| ·不同pH 对菠萝蛋白酶活性影响的测定 | 第38页 |
| ·饲料中常见金属离子对菠萝蛋白酶活性影响的测定 | 第38页 |
| ·对胃蛋白酶的耐受性研究 | 第38-39页 |
| ·胃蛋白溶液的配制 | 第38页 |
| ·方法 | 第38-39页 |
| ·菠萝蛋白酶红外光谱的测定 | 第39页 |
| 3 结果 | 第39-45页 |
| ·菠萝蛋白酶的紫外吸收谱图 | 第39页 |
| ·SDS-PAGE 电泳 | 第39-40页 |
| ·蛋白质泳动率与其分子量对数的关系图 | 第39-40页 |
| ·SDS-PAGE 电泳图谱 | 第40页 |
| ·温度对菠萝蛋白酶的影响 | 第40-41页 |
| ·pH 对菠萝蛋白酶活性的影响 | 第41页 |
| ·饲料中所含常见金属离子对菠萝蛋白酶活性的影响 | 第41-42页 |
| ·胃蛋白酶对菠萝蛋白酶酶活的影响 | 第42-44页 |
| ·Bromelain 红外光谱分析 | 第44-45页 |
| 4 分析与讨论 | 第45-46页 |
| 5 小结 | 第46-47页 |
| 第四章 菠萝蛋白酶防治K88+ETEC 腹泻机理的初步探讨 | 第47-54页 |
| 1 材料和方法 | 第47-48页 |
| ·菌株 | 第47页 |
| ·仪器和试剂 | 第47-48页 |
| ·试剂 | 第47页 |
| ·仪器 | 第47-48页 |
| ·试验动物 | 第48页 |
| ·细胞培养用液的配制 | 第48页 |
| 2 方法 | 第48-50页 |
| ·原代小肠黏膜上皮细胞的制备分离过程 | 第48-49页 |
| ·大肠杆菌的培养 | 第49页 |
| ·黏附试验 | 第49页 |
| ·小肠黏膜上皮细胞的取样 | 第49页 |
| ·试验设计及分组 | 第49页 |
| ·小肠黏膜上皮细胞的培养 | 第49页 |
| ·检测指标 | 第49-50页 |
| ·细胞存活率的测定 | 第49-50页 |
| ·细胞黏附情况观察 | 第50页 |
| ·黏附率的计算 | 第50页 |
| 3 结果 | 第50-52页 |
| ·大肠杆菌对十二指肠上皮细胞的黏附作用 | 第50-51页 |
| ·大肠杆菌对肠上皮细胞的黏附观察 | 第51-52页 |
| 4 讨论与分析 | 第52-54页 |
| 结论 | 第54-55页 |
| 本研究的创新点 | 第55页 |
| 有待进一步研究的问题 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-62页 |
| 致谢 | 第62-63页 |
| 缩略词表 | 第63-65页 |
| 附录 | 第65页 |