| 中文摘要 | 第1-3页 |
| Abstract | 第3-4页 |
| 中文文摘 | 第4-6页 |
| 目录 | 第6-9页 |
| 绪论 | 第9-21页 |
| 第一节 脂肪酶概述 | 第9-13页 |
| ·脂肪酶的来源及研究热点 | 第9页 |
| ·脂肪酶的定义及与酯酶的区别 | 第9-10页 |
| ·微生物脂肪酶的结构及分泌 | 第10-11页 |
| ·脂肪酶催化特性 | 第11-12页 |
| ·脂肪酶的应用 | 第12-13页 |
| 第二节 微生物脂肪酶的蛋白质工程策略 | 第13-19页 |
| ·前言 | 第13页 |
| ·脂肪酶化学修饰 | 第13-15页 |
| ·基因水平上的蛋白质进化 | 第15-16页 |
| ·分子进化需要解决的问题 | 第16-18页 |
| ·展望 | 第18-19页 |
| 第三节 课题的研究背景、内容、意义和创新点 | 第19-21页 |
| ·课题研究背景 | 第19页 |
| ·课题的研究意义 | 第19-20页 |
| ·课题研究的创新点 | 第20-21页 |
| 第一章 扩展青霉脂肪酶的异源真核表达 | 第21-33页 |
| 第一节 材料与方法 | 第21-27页 |
| ·材料 | 第21-23页 |
| ·实验方法 | 第23-27页 |
| 第二节 结果与分析 | 第27-31页 |
| ·扩展青霉脂肪酶基因的扩增 | 第27-28页 |
| ·重组表达质粒的构建与验证 | 第28-30页 |
| ·pPIC9K-pel电转化毕赤酵母GS115 | 第30页 |
| ·整合了pel基因的转化子发酵上清液酶活的定性检测 | 第30-31页 |
| 第三节 小结与讨论 | 第31-33页 |
| 第二章 扩展青霉脂肪酶"盖子"结构域两侧铰链区的定点突变 | 第33-51页 |
| 第一节 材料与方法 | 第34-41页 |
| ·材料 | 第34-35页 |
| ·实验方法 | 第35-41页 |
| 第二节 结果与分析 | 第41-48页 |
| ·确定环状质粒一步突变PCR的最佳反应体系 | 第41-42页 |
| ·环状质粒一步定点突变pel基因 | 第42-43页 |
| ·菌液PCR验证含突变重组质粒的转化子 | 第43-44页 |
| ·突变的重组质粒电转化毕赤酵母GS115 | 第44-45页 |
| ·含突变基因的转化子发酵液上清的酶活定性检测 | 第45-46页 |
| ·纯化的脂肪酶酶活定性检测 | 第46页 |
| ·纯化产物的SDS-PAGE检测 | 第46-47页 |
| ·纯化的蛋白质浓度测定 | 第47-48页 |
| ·纯化的蛋白质pNPL比色法测定酶活 | 第48页 |
| 第三节 小结与讨论 | 第48-51页 |
| 第三章 扩展青霉脂肪酶"盖子"结构域置换 | 第51-65页 |
| 第一节 材料与方法 | 第51-57页 |
| ·材料 | 第51-52页 |
| ·实验方法 | 第52-57页 |
| 第二节 结果与分析 | 第57-63页 |
| ·"盖子"置换的扩展青霉脂肪酶融合基因的获得 | 第57页 |
| ·完整片段的TA克隆 | 第57-58页 |
| ·插入完整片段的T载体的回复突变 | 第58-59页 |
| ·置换了盖子的重组表达质粒的构建与验证 | 第59-61页 |
| ·pPIC9K-pel(-lid)质粒电转化毕赤酵母GS115 | 第61-62页 |
| ·换盖重组转化子酶活的定性检测 | 第62-63页 |
| 第三节 小结与讨论 | 第63-65页 |
| 第四章 扩展青霉脂肪酶"盖子"右侧铰链区的置换 | 第65-73页 |
| 第一节 材料与方法 | 第65-68页 |
| ·材料 | 第65-66页 |
| ·实验方法 | 第66-68页 |
| 第二节 结果与分析 | 第68-72页 |
| ·置换了盖子右侧铰链区的扩展青霉脂肪酶融合基因的扩增 | 第68-69页 |
| ·置换盖子右侧铰链区的重组表达质粒的构建及验证 | 第69-71页 |
| ·pPIC9K-pel-76DIA78-79NYT81质粒电转化毕赤酵母GS115 | 第71页 |
| ·重组转化子酶活的定性检测 | 第71-72页 |
| 第三节 小结与讨论 | 第72-73页 |
| 第五章 结论 | 第73-75页 |
| 附录 | 第75-77页 |
| 参考文献 | 第77-85页 |
| 攻读学位期间承担的科研任务与主要成果 | 第85-87页 |
| 致谢 | 第87页 |
