| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-15页 |
| 第1章 文献综述 | 第15-31页 |
| ·哺乳动物细胞培养技术概述 | 第15页 |
| ·哺乳动物细胞表达重组蛋白技术的关键环节 | 第15-19页 |
| ·重组细胞系的构建 | 第15-18页 |
| ·培养基的开发优化和培养过程的设计 | 第18-19页 |
| ·重组细胞株的工程化改造 | 第19-29页 |
| ·抗凋亡的工程化改造 | 第20-24页 |
| ·提高目标蛋白的糖基化水平 | 第24-27页 |
| ·代谢工程改造 | 第27-28页 |
| ·细胞周期的调控 | 第28页 |
| ·强化目的蛋白的分泌 | 第28-29页 |
| ·本文研究背景 | 第29页 |
| ·本文的研究内容、目的及意义 | 第29-31页 |
| 第2章 材料与方法 | 第31-37页 |
| ·细胞株 | 第31页 |
| ·质粒的构建与转染 | 第31页 |
| ·蛋白免疫印迹分析 | 第31-32页 |
| ·细胞培养过程 | 第32-33页 |
| ·细胞计数 | 第33页 |
| ·酶联免疫吸附试验 | 第33页 |
| ·流式细胞仪分析 | 第33-34页 |
| ·线粒体的分离 | 第34页 |
| ·线粒体膜电位分析 | 第34页 |
| ·胞内ATP含量测定 | 第34页 |
| ·荧光定量PCR | 第34页 |
| ·谷氨酰胺和葡萄糖浓度测定 | 第34-35页 |
| ·比生产速率、比消耗速率的计算 | 第35页 |
| ·渗透压力测定 | 第35页 |
| ·唾液酸含量检测 | 第35页 |
| ·唾液酸转移酶活性测定 | 第35页 |
| ·重组30Kc19蛋白的制备 | 第35-36页 |
| ·糖基化分析 | 第36-37页 |
| 第3章 共表达30Kc6基因对细胞抗凋亡和抗体表达能力的影响及其作用机制 | 第37-50页 |
| ·引言 | 第37页 |
| ·实验设计 | 第37页 |
| ·结果 | 第37-49页 |
| ·共表达30Kc6基因对细胞凋亡的抑制作用 | 第37-39页 |
| ·共表达30Kc6基因抑制细胞凋亡的作用机制 | 第39-42页 |
| ·共表达30Kc6基因对抗体产量的影响 | 第42页 |
| ·共表达30Kc6基因对抗体比生产速率的影响 | 第42-44页 |
| ·共表达30Kc6基因对抗体重链和轻链mRNA相对含量的影响 | 第44页 |
| ·共表达30Kc6基因对线粒体膜电位和ATP生成的影响 | 第44-45页 |
| ·共表达30Kc6基因对抗体蛋白翻译过程的影响 | 第45-47页 |
| ·共表达30Kc6基因对营养物质比消耗速率的影响 | 第47页 |
| ·共表达30Kc6基因促进抗体产物表达的作用是否依赖抗体产品种类 | 第47-49页 |
| ·本章小结和讨论 | 第49-50页 |
| 第4章 高渗透压条件下共表达30Kc6基因对细胞抗凋亡的影响 | 第50-57页 |
| ·引言 | 第50页 |
| ·实验设计 | 第50页 |
| ·结果 | 第50-55页 |
| ·悬浮培养过程中共表达30Kc6基因对抗体产量的影响 | 第50-51页 |
| ·高渗透压条件下共表达30Kc6基因对细胞抗凋亡的影响 | 第51-53页 |
| ·高渗透压条件下共表达30Kc6基因对抗体表达能力的影响 | 第53-54页 |
| ·高渗透压条件下共表达30Kc6基因对线粒体膜电位的影响 | 第54-55页 |
| ·本章小结和讨论 | 第55-57页 |
| 第5章 共表达30Kc19基因对EPO产量和糖基化水平的影响 | 第57-74页 |
| ·引言 | 第57页 |
| ·实验设计 | 第57页 |
| ·结果 | 第57-73页 |
| ·共表达30Kc19基因对CHO细胞活性和抗体表达的影响 | 第57-59页 |
| ·共表达30Kc19基因对EPO产量和唾液酸含量的影响 | 第59-61页 |
| ·共表达30Kc19基因对唾液酸转移酶活性的影响 | 第61-62页 |
| ·共表达30Kc19基因对EPO比生产速率的影响 | 第62-63页 |
| ·共表达30Kc19基因对线粒体膜电位和ATP生成的影响 | 第63-64页 |
| ·悬浮培养过程中共表达30Kc19基因对细胞生长和EPO表达的影响 | 第64-65页 |
| ·悬浮培养过程中共表达30Kc19基因对EPO糖基化水平的影响 | 第65-73页 |
| ·本章小结和讨论 | 第73-74页 |
| 第6章 重组30Kc19蛋白添加物对CHO细胞生长、活性和EPO产量及其唾液酸含量的影响 | 第74-78页 |
| ·引言 | 第74页 |
| ·实验设计 | 第74页 |
| ·结果 | 第74-76页 |
| ·添加重组30Kc19蛋白对CHO细胞生长和EPO产量的影响 | 第74-76页 |
| ·添加重组30Kc19蛋白对EPO蛋白唾液酸含量的影响 | 第76页 |
| ·本章小结和讨论 | 第76-78页 |
| 第7章 全文总结与展望 | 第78-81页 |
| ·全文总结 | 第78-80页 |
| ·本文创新点 | 第80页 |
| ·建议及展望 | 第80-81页 |
| 参考文献 | 第81-97页 |
| 致谢 | 第97-98页 |
| 研究成果 | 第98页 |
