| 本论文的创新性研究工作 | 第1-4页 |
| 中文摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-9页 |
| 缩略词表 | 第9-15页 |
| 第一部分 文献综述及选题目的意义 | 第15-21页 |
| 第一章 白细胞介素2的研究进展 | 第15-21页 |
| 1 IL-2基因及其编码蛋白的分子结构 | 第15-16页 |
| 2 IL-2蛋白的生物学活性 | 第16页 |
| 3 IL-2的活性检测 | 第16-17页 |
| 4 IL-2的化学修饰 | 第17页 |
| 5 IL-2在兽医中的应用 | 第17-20页 |
| ·IL-2蛋白作为免疫佐剂 | 第17-18页 |
| ·IL-2基因作为免疫佐剂 | 第18-19页 |
| ·IL-2蛋白作为免疫治疗剂 | 第19-20页 |
| 6 选题目的和意义 | 第20-21页 |
| 第二部分 试验研究 | 第21-65页 |
| 第二章 GOIL-2基因在大肠杆菌中的表达、纯化及活性测定 | 第21-34页 |
| 1 材料 | 第21-22页 |
| ·菌株、毒株及质粒 | 第21页 |
| ·主要药品及试剂 | 第21-22页 |
| ·主要仪器 | 第22页 |
| 2 方法 | 第22-26页 |
| ·GoIL-2成熟片段的克隆、测序 | 第22-23页 |
| ·引物设计 | 第22页 |
| ·GoIL-2成熟片段基因的PCR扩增 | 第22-23页 |
| ·GoIL-2成熟蛋白基因表达载体的构建 | 第23-24页 |
| ·DH5α感受态细胞的制备 | 第23页 |
| ·GoIL-2成熟片段基因的克隆和鉴定 | 第23页 |
| ·GoIL-2成熟片段基因原核表达质粒的构建及酶切鉴定 | 第23-24页 |
| ·GoIL-2成熟片段基因在大肠杆菌中的表达及表达形式分析 | 第24页 |
| ·重组GoIL-2基因工程菌表达条件的优化 | 第24页 |
| ·重组GoIL-2蛋白的纯化 | 第24页 |
| ·重组GoIL-2蛋白的透析 | 第24-25页 |
| ·MTT法检测重组GoIL-2蛋白生物学活性 | 第25-26页 |
| ·淋巴细胞悬液制备 | 第25页 |
| ·重组GoIL-2蛋白相对生物活性的测定 | 第25-26页 |
| 3 结果 | 第26-31页 |
| ·GoIL-2基因的PCR扩增 | 第26页 |
| ·GoIL-2基因的克隆和鉴定 | 第26页 |
| ·GoIL-2基因原核表达质粒的构建及鉴定 | 第26-27页 |
| ·GoIL-2基因在大肠杆菌中的表达及表达形式分析 | 第27-28页 |
| ·重组GoIL-2基因工程菌表达条件的优化结果 | 第28-30页 |
| ·诱导时间对表达的影响 | 第28-29页 |
| ·IPTG浓度对表达的影响 | 第29页 |
| ·诱导温度对表达的影响 | 第29-30页 |
| ·重组蛋白过柱纯化 | 第30页 |
| ·重组GoIL-2蛋白生物活性测定 | 第30-31页 |
| 4 讨论 | 第31-34页 |
| ·GoIL-2基因原核表达质粒的构建 | 第31-32页 |
| ·重组GoIL-2表达条件的优化 | 第32-33页 |
| ·重组GoIL-2蛋白活性检测 | 第33-34页 |
| 第三章 重组GOIL-2对小鹅瘟病毒VP3基因亚单位工程疫苗、GPV弱毒疫苗免疫青年鹅佐剂效应研究 | 第34-51页 |
| 1 材料 | 第34-35页 |
| ·菌、毒株及质粒 | 第34页 |
| ·试验动物 | 第34页 |
| ·主要药品及试剂 | 第34页 |
| ·主要仪器 | 第34-35页 |
| 2 方法 | 第35-38页 |
| ·重组GoIL-2蛋白佐剂的制备 | 第35页 |
| ·动物试验分组免疫 | 第35页 |
| ·血样采集 | 第35-36页 |
| ·MTT法检测鹅外周血T淋巴细胞增殖效果 | 第36页 |
| ·间接ELISA法检测鹅血清抗体IgG的动态变化 | 第36页 |
| ·GPV CHv强毒株TCID_(50)测定 | 第36-37页 |
| ·待检血清样品的制备及微量病毒中和试验 | 第37-38页 |
| 3 结果 | 第38-45页 |
| ·GPV CHv强毒株TCID_(50)测定 | 第38页 |
| ·动物试验结果 | 第38-45页 |
| ·不同剂量重组GoIL-2蛋白与小鹅瘟VP3基因工程重组亚单位疫苗Ag16v免疫后鹅外周血T淋巴细胞增殖效果 | 第38-39页 |
| ·不同剂量重组GoIL-2蛋白与小鹅瘟VP3基因工程重组亚单位疫苗Ag16v免疫后血清抗体IgG的动态变化 | 第39-40页 |
| ·不同剂量重组GoIL-2与小鹅瘟VP3基因工程重组亚单位疫苗Ag16v免疫后鹅血清抗体中和效价动态变化 | 第40-41页 |
| ·不同剂量重组GoIL-2蛋白与小鹅瘟VP3基因工程重组亚单位疫苗Ag10v免疫后鹅外周血T淋巴细胞增殖效果 | 第41-42页 |
| ·不同剂量重组GoIL-2蛋白与小鹅瘟VP3基因工程重组亚单位疫苗Ag10v免疫后鹅血清抗体IgG的动态变化 | 第42页 |
| ·不同剂量重组GoIL-2与小鹅瘟VP3基因工程重组亚单位疫苗Ag10v免疫后鹅血清抗体中和效价动态变化 | 第42-43页 |
| ·重组GoIL-2蛋白与GPV弱毒疫苗免疫后鹅外周血T淋巴细胞增殖效果 | 第43-44页 |
| ·重组GoIL-2蛋白与GPV弱毒疫苗免疫后血清抗体IgG的动态变化 | 第44页 |
| ·重组GoIL-2蛋白与GPV弱毒疫苗免疫后鹅血清抗体中和效价动态变化 | 第44-45页 |
| 4 讨论 | 第45-51页 |
| ·重组GoIL-2蛋白的乳化对其佐剂效果的影响 | 第45页 |
| ·重组GoIL-2蛋白免疫时间对其佐剂效果的影响 | 第45-46页 |
| ·重组GoIL-2蛋白对小鹅瘟VP3基因工程重组亚单位疫苗、GPV弱毒疫苗免疫青年鹅的外周血T淋巴细胞转化效果的影响 | 第46-47页 |
| ·小鹅瘟VP3基因工程重组亚单位疫苗、GPV弱毒疫苗免疫青年鹅的血清抗体IgG的影响 | 第47-48页 |
| ·重组GoIL-2蛋白对小鹅瘟VP3基因工程重组亚单位疫苗、GPV弱毒疫苗免疫青年鹅的中和效价的影响 | 第48-49页 |
| ·重组GoIL-2蛋白不同免疫剂量对其佐剂效应的影响 | 第49-51页 |
| 第四章 重组GOIL-2对小鹅瘟VP3基因工程重组亚单位疫苗、GPV弱毒疫苗免疫开产前种鹅佐剂效应研究 | 第51-65页 |
| 1 材料 | 第51-52页 |
| ·疫苗、毒株、细胞 | 第51页 |
| ·试验动物 | 第51页 |
| ·主要试剂及配制 | 第51-52页 |
| ·主要仪器设备 | 第52页 |
| 2 方法 | 第52-53页 |
| ·重组鹅IL-2蛋白佐剂的制备 | 第52页 |
| ·动物试验分组、免疫及样品采集 | 第52页 |
| ·卵黄收集及处理方法 | 第52页 |
| ·血清和卵黄样品ELISA抗体的检测 | 第52页 |
| ·血清和卵黄样品微量病毒中和试验 | 第52-53页 |
| ·免疫种鹅后代雏鹅攻毒保护试验 | 第53页 |
| ·攻毒保护率的计算方法 | 第53页 |
| 3 结果 | 第53-62页 |
| ·重组GoIL-2对小鹅瘟VP3基因工程重组亚单位疫苗Ag16v免疫种鹅卵黄ELISA抗体的动态变化 | 第53页 |
| ·重组GoIL-2对小鹅瘟VP3基因工程重组亚单位疫苗Ag16v免疫种鹅血清ELISA抗体的动态变化 | 第53-54页 |
| ·重组GoIL-2对小鹅瘟VP3基因工程重组亚单位疫苗Ag16v免疫种鹅卵黄中和抗体的动态变化 | 第54-55页 |
| ·重组GoIL-2对小鹅瘟VP3基因工程重组亚单位疫苗Ag16v免疫种鹅血清中和抗体的动态变化 | 第55页 |
| ·重组GoIL-2对小鹅瘟VP3基因工程重组亚单位疫苗Ag10v免疫种鹅卵黄ELISA抗体的动态变化 | 第55-56页 |
| ·重组GoIL-2对小鹅瘟VP3基因工程重组亚单位疫苗Ag10v免疫种鹅血清ELISA抗体的动态变化 | 第56-57页 |
| ·重组GoIL-2对小鹅瘟VP3基因工程重组亚单位疫苗Ag10v免疫种鹅卵黄中和抗体的动态变化 | 第57页 |
| ·重组GoIL-2对小鹅瘟VP3基因工程重组亚单位疫苗Ag10v免疫种鹅血清中和抗体的动态变化 | 第57-58页 |
| ·重组GoIL-2对GPV弱毒疫苗免疫种鹅卵黄ELISA抗体的动态变化 | 第58页 |
| ·重组GoIL-2对GPV弱毒疫苗免疫种鹅血清ELISA抗体的动态变化 | 第58-59页 |
| ·重组GoIL-2对GPV弱毒疫苗免疫种鹅卵黄中和抗体的动态变化 | 第59-60页 |
| ·重组GoIL-2对GPV弱毒疫苗免疫种鹅血清中和抗体的动态变化 | 第60页 |
| ·后代雏鹅攻毒保护试验结果 | 第60-62页 |
| ·重组GoIL-2对小鹅瘟VP3基因工程重组亚单位疫苗Ag16v免疫种鹅后仔代对小鹅瘟强毒攻击的保护结果 | 第60-61页 |
| ·重组GoIL-2对小鹅瘟VP3基因工程重组亚单位疫苗Ag10v免疫种鹅后仔代对小鹅瘟强毒攻击的保护结果 | 第61-62页 |
| ·重组GoIL-2对GPV弱毒疫苗免疫种鹅后仔代对小鹅瘟强毒攻击的保护结果 | 第62页 |
| 4 讨论 | 第62-65页 |
| ·种鹅血清抗体与卵黄抗体及其后代雏鹅免疫保护率的关系 | 第62-63页 |
| ·重组GoIL-2对小鹅瘟VP3基因工程重组亚单位疫苗、GPV弱毒疫苗免疫种鹅后种鹅卵黄抗体动态变化的影响及其子一代保护率的关系 | 第63-64页 |
| ·重组鹅IL-2蛋白研究意义及展望 | 第64-65页 |
| 第三部分 结论 | 第65-66页 |
| 第四部分 参考文献 | 第66-76页 |
| 附录一 | 第76-78页 |
| 附录二 | 第78-93页 |
| 致谢 | 第93-94页 |
| 作者简介 | 第94页 |
