| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-8页 |
| 前言 | 第8-20页 |
| 1.猪细小病毒VP2基因及其编码蛋白的研究进展 | 第8-12页 |
| 2.猪圆环病毒2型ORF2基因及其编码蛋白的研究进展 | 第12-16页 |
| 3.病毒样颗粒的研究进展 | 第16-19页 |
| 4.实验目的及意义 | 第19-20页 |
| 实验部分 | 第20-53页 |
| 1.材料 | 第20-21页 |
| ·实验材料 | 第20页 |
| ·主要仪器 | 第20-21页 |
| 2.方法 | 第21-35页 |
| ·PPV VP2基因的PCR、克隆及鉴定 | 第21-23页 |
| ·PPV VP2基因的引物设计及合成 | 第21页 |
| ·PPV病毒基因组DNA的提取 | 第21页 |
| ·PPV VP2基因的PCR | 第21-22页 |
| ·目的基因的回收 | 第22页 |
| ·VP2基因的克隆及鉴定 | 第22-23页 |
| ·PCV2 ORF2基因的PCR、克隆及鉴定 | 第23-26页 |
| ·PCV2 ORF2基因的引物设计 | 第23-24页 |
| ·质粒pPI-2.EGFP.VP2.ORF2的抽提 | 第24页 |
| ·ORF2基因的PCR | 第24-25页 |
| ·ORF2基因的回收 | 第25页 |
| ·ORF2基因的克隆及鉴定 | 第25-26页 |
| ·含PPVVP2基因和PCV2 ORF2基因的重组质粒载体的构建 | 第26-29页 |
| ·PCV2 ORF2 DNA的获得 | 第26页 |
| ·含PPV VP2基因的pMD18-T Simple开环载体的准备 | 第26-27页 |
| ·PPV VP2基因和PCV2 ORF2基因的连接及转化 | 第27-28页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第28-29页 |
| ·含PPVVP2、PCV2 ORF2基因和绿色荧光蛋白基因表达载体质粒(pEGFP.VO.H和pEGFP.VO.S)的构建 | 第29-30页 |
| ·VP2-ORF2(H)和VP2-ORF2(S)基因片段的酶切回收 | 第29页 |
| ·质粒pEGFP-C1酶切回收 | 第29页 |
| ·连接与转化 | 第29-30页 |
| ·pEGFP.VO.H和p.EGFP.VO.S重组质粒载体的鉴定 | 第30页 |
| ·PEGFP.VO.H和PEGFP.VO.S质粒DNA转染Cos7细胞 | 第30-31页 |
| ·去内毒素的质粒pEGFP.VO.H和pEGFP.VO.S DNA的抽提 | 第30页 |
| ·pEGFP.VO.H和pEGFEVO.S质粒DNA的转染 | 第30-31页 |
| ·超薄切片电镜观察 | 第31页 |
| ·VLPs的免疫原性 | 第31-35页 |
| ·pEGFP.VO.H和pEGFP.VO.S质粒DNA的大量抽提与纯化 | 第31-32页 |
| ·质粒DNA的免疫 | 第32页 |
| ·血样的采集 | 第32页 |
| ·T淋巴细胞数量的动态变化检测 | 第32-33页 |
| ·PPV抗体检测 | 第33页 |
| ·PCV2抗体检测 | 第33-35页 |
| 3.结果与分析 | 第35-46页 |
| ·PMD-VP2的构建 | 第35-36页 |
| ·PPV VP2基因的PCR扩增 | 第35页 |
| ·PCR及酶切鉴定 | 第35-36页 |
| ·序列测定 | 第36页 |
| ·PMD-ORF2的构建 | 第36-37页 |
| ·PCV2 ORF2基因的PCR扩增 | 第36页 |
| ·酶切鉴定 | 第36-37页 |
| ·重组质粒PPVP2-ORF2.H和PPVP2-ORF2.S的构建 | 第37-38页 |
| ·重组质粒的PCR鉴定 | 第37页 |
| ·重组质粒的单酶切鉴定 | 第37-38页 |
| ·ORF2基因的插入方向鉴定 | 第38页 |
| ·重组质粒的序列测定 | 第38页 |
| ·含PPVVP2、PCV2ORF2基因和绿色荧光蛋白基因表达载体质粒(PEGFP.VO.H和PEGFP.VO.S)的构建 | 第38-39页 |
| ·PCR鉴定 | 第38-39页 |
| ·双酶切鉴定 | 第39页 |
| ·PEGFP.VO.H和PEGFP.VO.S质粒DNA转染Cos7细胞的荧光观察 | 第39-40页 |
| ·超薄切片电镜观察 | 第40-41页 |
| ·VLPs的免疫原性研究 | 第41-46页 |
| ·接种后小白鼠的临床表现 | 第41页 |
| ·T淋巴细胞数量的动态变化检测 | 第41-43页 |
| ·PPV抗体检测 | 第43-44页 |
| ·PCV2抗体检测 | 第44-46页 |
| 4.讨论 | 第46-52页 |
| ·目的基因的选择 | 第46-47页 |
| ·真核表达载体的选择 | 第47页 |
| ·真核表达质粒的构建 | 第47-48页 |
| ·重组质粒的转染 | 第48-49页 |
| ·重组质粒的表达情况 | 第49-50页 |
| ·重组质粒的免疫原性 | 第50-52页 |
| ·细胞免疫 | 第50-51页 |
| ·体液免疫 | 第51-52页 |
| 5.结论 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-58页 |
| 致谢 | 第58-59页 |
| 附录 | 第59-62页 |
