农抗9512-3高产菌株的选育
| 摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 1 前言 | 第11-26页 |
| ·生物农药 | 第11页 |
| ·农用杀虫抗生素 | 第11-16页 |
| ·阿维菌素(Avermectin) | 第12页 |
| ·伊维菌素(Ivermectin) | 第12-13页 |
| ·多拉菌素(Doramectin) | 第13-14页 |
| ·塞拉菌素(Selamectin) | 第14-15页 |
| ·埃普利诺菌素(Eprinomectin) | 第15页 |
| ·莫西菌素(Moxidectin) | 第15-16页 |
| ·农用抗生素的发展及研究现状 | 第16-17页 |
| ·农用抗生素的研究趋向 | 第17-18页 |
| ·筛选新的农用抗生案品种 | 第17页 |
| ·选育高产菌株 | 第17-18页 |
| ·优化发酵过程 | 第18页 |
| ·改造农用抗生素的结构 | 第18页 |
| ·农用抗生素产生菌的诱变育种 | 第18-20页 |
| ·提高生产力 | 第18-19页 |
| ·合成新的抗生素产品 | 第19页 |
| ·减少杂质，提高抗生素纯度 | 第19页 |
| ·改进菌株发酵工艺特性 | 第19-20页 |
| ·用于研究推测抗生素的生物合成途径 | 第20页 |
| ·诱变与其他育种方法相结合 | 第20页 |
| ·抗生素产生菌诱变育种技术研究进展 | 第20-22页 |
| ·传统的诱变育种技术 | 第21页 |
| ·原生质体融合技术 | 第21页 |
| ·重组 DNA技术改良抗生素产生菌 | 第21-22页 |
| ·抗生素产生菌诱变育种的筛选方法 | 第22-25页 |
| ·随机筛选法 | 第23页 |
| ·平板菌落预筛 | 第23-25页 |
| ·根据形态筛选突变株 | 第23页 |
| ·根据平板菌落生化反应筛选突变株 | 第23-24页 |
| ·耐前体及其结构类似物突变株的筛选 | 第24页 |
| ·耐自身产物及其类似物突变株的筛选 | 第24-25页 |
| ·耐分解阻遏物突变株的筛选 | 第25页 |
| ·营养缺陷型菌株的筛选 | 第25页 |
| ·本试验研究的目的与意义 | 第25-26页 |
| 2 材料与方法 | 第26-35页 |
| ·试验材料 | 第26-29页 |
| ·供试菌株 | 第26页 |
| ·培养基 | 第26-27页 |
| ·斜面培养基 | 第26页 |
| ·改良高氏培养基 | 第26页 |
| ·种子培养基 | 第26页 |
| ·液体发酵培养基 | 第26页 |
| ·固体发酵培养基 | 第26页 |
| ·菌丝体培养基(YEME) | 第26-27页 |
| ·原生质体再生培养基 | 第27页 |
| ·试剂 | 第27页 |
| ·标准品 | 第27页 |
| ·微量元素液 | 第27页 |
| ·P缓冲液 | 第27页 |
| ·溶菌酶溶液 | 第27页 |
| ·Tris-HCL缓冲液 | 第27页 |
| ·展开剂溶液 | 第27页 |
| ·主要试剂和仪器 | 第27-29页 |
| ·试验中所用到的主要药品和试剂 | 第27-29页 |
| ·试验中所用到的主要试验仪器 | 第29页 |
| ·试验方法 | 第29-31页 |
| ·培养条件 | 第29页 |
| ·斜面菌种培养条件 | 第29页 |
| ·种子培养条件 | 第29页 |
| ·发酵培养条件 | 第29页 |
| ·原生质体制备培养条件 | 第29页 |
| ·原生质体再生培养条件 | 第29页 |
| ·分析方法 | 第29-30页 |
| ·初筛(菌块-TLC法) | 第29-30页 |
| ·复筛(HPLC法) | 第30页 |
| ·菌丝体干重(DCW)的测定 | 第30页 |
| ·正突变率的计算 | 第30页 |
| ·诱变处理方法 | 第30-31页 |
| ·斜面菌种制备 | 第30页 |
| ·孢子悬液的制备 | 第30-31页 |
| ·发酵后处理 | 第31页 |
| ·高产菌株的选育 | 第31-32页 |
| ·出发菌株的复壮 | 第31页 |
| ·紫外诱变处理 | 第31页 |
| ·紫外-前体耐受性复合诱变 | 第31页 |
| ·紫外线-氯化锂复合诱变 | 第31-32页 |
| ·抗性菌株选育 | 第32页 |
| ·稳定性试验 | 第32页 |
| ·原生质体的制备、计数、再生和融合 | 第32-33页 |
| ·原生质体的制备方法 | 第32页 |
| ·原生质体的计数方法 | 第32-33页 |
| ·原生质体融合的方法 | 第33页 |
| ·融合率的计算方法 | 第33页 |
| ·基因组重排 | 第33-35页 |
| ·第一轮原生质体融合 | 第33-34页 |
| ·杂合再生子代菌丝体的培养 | 第34页 |
| ·第二轮一第五轮原生质体融 | 第34-35页 |
| 3. 结果与分析 | 第35-54页 |
| ·农抗9512-3分析方法的建立 | 第35-36页 |
| ·HPLC定量分析方法的建立 | 第35-36页 |
| ·菌块-薄层层析法(TLC法) | 第36页 |
| ·出发菌株的选择 | 第36-37页 |
| ·高产菌株的选育结果 | 第37-40页 |
| ·紫外诱变处理 | 第37-38页 |
| ·紫外线照射不同时间的诱变效果比较 | 第37页 |
| ·紫外诱变菌株的筛选 | 第37-38页 |
| ·紫外-前体耐受性复合筛选 | 第38-39页 |
| ·加入前体时紫外线照射不同时间的诱变效果比较 | 第38页 |
| ·紫外-前体耐受性复合诱变菌株的筛选 | 第38-39页 |
| ·紫外-氯化锂复合诱变 | 第39-40页 |
| ·紫外线-氯化锂复合诱变对 UV-Q9菌株的影响 | 第39页 |
| ·紫外线-氯化锂诱变菌株的筛选 | 第39-40页 |
| ·抗性菌株筛选 | 第40-42页 |
| ·链霉素(Streptomycin)抗性菌株选育 | 第40-41页 |
| ·庆大霉素(Gentamicin)抗性菌株选育 | 第41-42页 |
| ·抗性菌株的遗传稳定性 | 第42页 |
| ·原生质体制备的影响因素 | 第42-48页 |
| ·菌丝培养时间对原生质体形成的影响 | 第42-43页 |
| ·甘氨酸对原生质体形成的影响 | 第43-44页 |
| ·溶菌酶浓度对原生质体形成的影响 | 第44-45页 |
| ·酶解温度对原生质体形成的影响 | 第45-46页 |
| ·酶解时间对原生质体形成的影响 | 第46页 |
| ·PEG相对分子量对融合率的影响 | 第46-47页 |
| ·PEG1000浓度对融合率的影响 | 第47-48页 |
| ·原生质体保存的时间对再生的影响 | 第48页 |
| ·基因组重排 | 第48-53页 |
| ·出发菌株的选择 | 第48-49页 |
| ·融合轮数与融合效率的关系 | 第49页 |
| ·四亲本重组高产菌株的选育 | 第49-51页 |
| ·传代稳定性试验 | 第51-53页 |
| ·诱变和筛选流程图 | 第53-54页 |
| 4 讨论 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-60页 |
| 致谢 | 第60页 |
