| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-10页 |
| 缩略语表 | 第10-11页 |
| 1 前言 | 第11-17页 |
| ·乳糖酶的来源 | 第11页 |
| ·乳糖酶的应用 | 第11-13页 |
| ·治疗乳糖不耐受症 | 第11-12页 |
| ·生产低聚半乳糖和功能性低聚糖 | 第12页 |
| ·促进果蔬软化和成熟 | 第12-13页 |
| ·其他用途 | 第13页 |
| ·原核基因表达系统 | 第13-15页 |
| ·枯草芽孢杆菌表达系统 | 第13-14页 |
| ·链霉菌表达系统 | 第14页 |
| ·大肠杆菌表达系统 | 第14-15页 |
| ·基因工程菌技术在乳糖酶生产中的应用 | 第15-16页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第16页 |
| ·技术路线 | 第16-17页 |
| 2 材料与方法 | 第17-26页 |
| ·材料 | 第17-18页 |
| ·菌株和重组表达质粒 | 第17页 |
| ·酶与试剂 | 第17页 |
| ·仪器 | 第17页 |
| ·培养基 | 第17页 |
| ·常用试剂的配制 | 第17-18页 |
| ·方法 | 第18-26页 |
| ·乳糖酶在大肠杆菌中的表达和纯化 | 第18-22页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第18-19页 |
| ·重组表达质粒pET-28a(+)-lac4转化大肠杆菌BL21 | 第19页 |
| ·乳糖酶酶活性标准曲线的绘制和酶活性测定 | 第19-21页 |
| ·蛋白浓度测定标准曲线绘制和蛋白浓度测定 | 第21页 |
| ·乳糖酶的诱导表达和SDS-PAGE检测 | 第21页 |
| ·乳糖酶的纯化和SDS-PAGE检测 | 第21-22页 |
| ·原核表达乳糖酶的酶学性质测定 | 第22-24页 |
| ·乳糖酶原酶液的制备 | 第22页 |
| ·乳糖酶酶活性的检测 | 第22页 |
| ·乳糖酶的最适pH测定 | 第22页 |
| ·乳糖酶的最适温度测定 | 第22-23页 |
| ·乳糖酶的pH稳定性测定 | 第23页 |
| ·乳糖酶的热稳定性测定 | 第23页 |
| ·金属离子和化学试剂对乳糖酶活性的影响 | 第23页 |
| ·乳糖酶的K_m和V_(max)的测定 | 第23-24页 |
| ·乳糖酶基因工程菌发酵条件探索 | 第24-26页 |
| ·C源单因素实验 | 第24页 |
| ·N源单因素实验 | 第24页 |
| ·C、N源正交实验 | 第24-25页 |
| ·工程菌发酵条件优化正交试验 | 第25-26页 |
| 3 结果与分析 | 第26-41页 |
| ·乳糖酶在大肠杆菌中的表达和纯化 | 第26-29页 |
| ·乳糖酶酶活性标准曲线的绘制 | 第26页 |
| ·蛋白浓度测定标准曲线绘制 | 第26-27页 |
| ·乳糖酶的诱导表达和SDS-PAGE检测 | 第27-28页 |
| ·乳糖酶的纯化和SDS-PAGE检测 | 第28-29页 |
| ·原核表达乳糖酶的酶学性质测定 | 第29-36页 |
| ·乳糖酶的最适pH | 第29-30页 |
| ·乳糖酶的最适温度测定 | 第30-31页 |
| ·乳糖酶的pH稳定性测定 | 第31-32页 |
| ·乳糖酶的热稳定性测定 | 第32-34页 |
| ·金属离子和化学试剂对乳糖酶活性的影响 | 第34-35页 |
| ·乳糖酶的K_m和V_(max)的测定 | 第35-36页 |
| ·乳糖酶基因工程菌发酵条件探索 | 第36-41页 |
| ·C源单因素实验结果 | 第36-37页 |
| ·N源单因素实验结果 | 第37页 |
| ·C、N源正交实验结果 | 第37-39页 |
| ·工程菌发酵条件正交试验 | 第39-41页 |
| 4 结论与讨论 | 第41-45页 |
| ·结论 | 第41-42页 |
| ·讨论 | 第42-45页 |
| ·乳糖酶的原核表达 | 第42-43页 |
| ·乳糖酶的酶学性质 | 第43页 |
| ·乳糖酶发酵条件探索 | 第43-45页 |
| 5 展望 | 第45-46页 |
| 参考文献 | 第46-49页 |
| 致谢 | 第49页 |