| 目录 | 第1-7页 |
| 摘要 | 第7-8页 |
| ABSTRACT | 第8-10页 |
| 缩略词(ABBREVIATION) | 第10-11页 |
| 1.文献综述 | 第11-28页 |
| ·副猪嗜血杆菌病及其危害 | 第11-13页 |
| ·副猪嗜血杆菌病的病原学 | 第11页 |
| ·副猪嗜血杆菌病的流行病学及危害 | 第11-12页 |
| ·副猪嗜血杆菌病的致病性与毒力 | 第12-13页 |
| ·副猪嗜血杆菌病的病理学 | 第13页 |
| ·猪链球菌病及其危害 | 第13-18页 |
| ·猪链球菌病的病原学 | 第14页 |
| ·猪链球菌病的的流行病学及危害 | 第14-16页 |
| ·猪链球菌病的毒力因子 | 第16-17页 |
| ·猪链球菌的致病机理 | 第17-18页 |
| ·猪链球菌病的病理学 | 第18页 |
| ·金属离子对细菌基因表达的调控 | 第18-26页 |
| ·铁对细菌基因表达的调控 | 第18-19页 |
| ·fur基因、Fur蛋白和"Fur box" | 第19-22页 |
| ·Fur家族蛋白 | 第22-26页 |
| ·蛋白质与核酸的相互作用及其研究方法 | 第26-28页 |
| ·蛋白质与核酸的相互作用 | 第26页 |
| ·蛋白质与核酸的相互作用的研究方法(EMSA、SPR、footprinting) | 第26-28页 |
| 2.研究目的与意义 | 第28-29页 |
| 3.材料与方法 | 第29-43页 |
| ·实验材料 | 第29-33页 |
| ·质粒及菌株 | 第29-30页 |
| ·主要酶以及试剂盒来源 | 第30页 |
| ·培养基、抗生素配制 | 第30页 |
| ·使用溶液及储存液 | 第30-33页 |
| ·实验方法 | 第33-43页 |
| ·细菌的增殖及基因组的提取 | 第33-34页 |
| ·HPS和SS基因的扩增 | 第34-35页 |
| ·PCR产物的回收与纯化 | 第35页 |
| ·fur-HPS和perR-SS的酶切及产物的回收与纯化 | 第35-36页 |
| ·PCR产物的克隆与测序 | 第36-37页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备(氯化钙法) | 第37页 |
| ·连接产物及质粒的转化 | 第37页 |
| ·质粒的提取 | 第37-38页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第38页 |
| ·重组表达质粒pET-fur-HPS和pET-perR-SS的构建 | 第38-39页 |
| ·诱导表达 | 第39-41页 |
| ·蛋白纯化及脱盐浓缩 | 第41页 |
| ·SDS-PAGE电泳 | 第41-42页 |
| ·Fur蛋白与目标基因结合 | 第42页 |
| ·非变性丙烯酰胺凝胶电泳 | 第42-43页 |
| 4.结果 | 第43-61页 |
| ·副猪嗜血杆菌的FUR基因和猪链球菌的FUR基因的克隆 | 第43-44页 |
| ·副猪嗜血杆菌的FUR基因和猪链球菌的PERR基因和表达载体的构建 | 第44-45页 |
| ·副猪嗜血杆菌可能含有FUR-BOX基因和猪链球菌可能含有PERR-BOX基因的克隆 | 第45-48页 |
| ·表达产物的SDS-PAGE分析 | 第48-50页 |
| ·蛋白浓度的测定 | 第50-51页 |
| ·FUR蛋白与目标DNA的相互作用及非变性丙烯酰胺凝胶电泳分析 | 第51-61页 |
| ·相同浓度的同种DNA与同种Fur蛋白浓度梯度结合活性比较 | 第51-56页 |
| ·相同浓度的不同种DNA与相同浓度的同种蛋白结合活性比较 | 第56-57页 |
| ·相同浓度的不同种DNA与相同浓度的同种蛋白在不同金属离子的环境中结合活性比较 | 第57-61页 |
| 5.讨论 | 第61-68页 |
| ·副猪嗜血杆菌的FUR基因和猪链球菌的FUR基因的克隆与表达 | 第61-62页 |
| ·可能存在"FUR BOX"和"PERR BOX"的DNA片段 | 第62-64页 |
| ·副猪嗜血杆菌Fur蛋白目标基因的选择 | 第63-64页 |
| ·猪链球菌Fur蛋白目标基因的选择 | 第64页 |
| ·DNA片段与FUR蛋白相互作用活性测定中的问题 | 第64-68页 |
| 6.结论 | 第68-69页 |
| 参考文献 | 第69-76页 |
| 致谢 | 第76页 |
