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锰中毒致体外培养鸡支持—生精细胞凋亡机制的研究

中文摘要第1-9页
英文摘要第9-11页
1 前言第11-17页
   ·锰的雄性生殖毒性第11-14页
     ·锰对睾丸形态学的影响第11-12页
     ·锰对睾丸生殖功能的影响第12-13页
     ·锰对睾丸酶活性的影响第13页
     ·锰的遗传毒性第13-14页
   ·线粒体凋亡途径的研究进展第14-16页
     ·线粒体通透性的转变和膜电位的崩溃第14页
     ·线粒体细胞色素C 的释放第14-15页
     ·Bcl-2 蛋白家族在线粒体凋亡途径中的调控作用第15-16页
   ·锰与细胞凋亡第16页
   ·试验研究的目的与意义第16-17页
2 材料与方法第17-24页
   ·主要仪器与试剂第17-18页
     ·主要仪器第17页
     ·主要试剂第17-18页
   ·鸡支持-生精细胞的制备、鉴定及处理第18页
     ·鸡支持-生精细胞的分离和培养第18页
     ·鸡支持-生精细胞的鉴定第18页
   ·检测项目与方法第18-23页
     ·锰致鸡支持-生精细胞活性的影响第18-19页
     ·锰致鸡支持-生精细胞凋亡的形态学观察第19-20页
     ·细胞DNA 损伤的检测第20页
     ·流式细胞仪检测线粒体膜电位(Δψm)第20页
     ·Western blot 检测胞浆内Cyt-c 蛋白表达第20-21页
     ·线粒体呼吸链复合物活性检测第21页
     ·分光光度法检测Caspase-9,3 活性第21页
     ·鸡支持-生精细胞Bak、Bcl-x 和Caspase-3 基因mRNA 表达量的检测第21-23页
   ·实验数据分析与统计第23-24页
3 试验结果与分析第24-42页
   ·鸡支持-生精细胞体外培养及鉴定结果第24页
   ·锰对鸡支持-生精细胞活性影响的检测结果第24-27页
     ·细胞增殖抑制率检测结果第24-25页
     ·乳酸脱氢酶(LDH)活性的检测结果第25-26页
     ·细胞脱落计数和脱落细胞活性的检测结果第26-27页
   ·锰致鸡支持-生精细胞凋亡的形态学检测结果第27-30页
     ·MnCl_2 作用鸡支持-生精细胞形态学观察第27页
     ·AO/EB 双荧光染色检测结果第27-29页
     ·透射电镜对细胞超微结构观察结果第29-30页
   ·锰致鸡支持-生精细胞DNA 损伤的检测结果第30-32页
     ·DNA Ladder 检测结果第30-31页
     ·脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)检测结果第31-32页
   ·MnCl_2 致鸡支持-生精细胞线粒体损伤的检测结果第32-34页
     ·锰对鸡支持-生精细胞Δψm 影响的检测结果第32-33页
     ·鸡支持-生精细胞胞浆内Cyt-c 蛋白表达检测结果第33-34页
     ·锰对鸡支持-生精细胞线粒体呼吸链复合物活性影响的检测结果第34页
   ·MnCl_2 对鸡支持-生精细胞Caspase-9,3 活性影响的检测结果第34-35页
   ·MnCl_2 对鸡支持-生精细胞Bak、Bcl-x 和Caspase-3 基因mRNA 表达量影响的检测结果第35-42页
     ·Bak、Bcl-x 和Caspase-3 基因PCR 产物鉴定结果第35-38页
     ·实时定量PCR 检测结果第38-42页
4 讨论第42-51页
   ·鸡支持-生精细胞体外培养及鉴定第42页
   ·锰对鸡支持-生精细胞活性影响第42-43页
     ·锰对鸡支持-生精细胞增殖抑制率的影响第42页
     ·锰对鸡支持-生精细胞上清液中LDH 活性的影响第42-43页
     ·锰对鸡支持-生精细胞贴壁性能和脱落细胞活性的影响第43页
   ·锰致鸡支持-生精细胞凋亡形态学的影响第43-45页
     ·光学显微镜观察锰致鸡支持-生精细胞凋亡形态学变化第43-44页
     ·透射观察锰致鸡支持-生精细胞凋亡形态学变化第44-45页
   ·锰致鸡支持-生精细胞DNA 损伤的影响第45-46页
     ·DNA Ladder 法检测锰致鸡支持-生精细胞DNA 损伤的影响第45页
     ·TUNEL 法检测锰致鸡支持-生精细胞DNA 损伤的影响第45-46页
   ·锰对鸡支持-生精细胞线粒体损伤的影响第46-48页
     ·锰对鸡支持-生精细胞Δψm 的影响第46页
     ·锰对鸡支持-生精细胞胞浆内Cyt-c 蛋白表达的影响第46-47页
     ·锰对鸡支持-生精细胞线粒体呼吸链复合物活性的影响第47-48页
   ·锰对鸡支持-生精细胞Caspase-9,3 活性和Caspase-3 基因mRNA 表达量的影响第48-49页
   ·锰对鸡支持-生精细胞Bak、Bcl-x mRNA 表达量的影响第49-51页
5 结论第51-52页
致谢第52-53页
参考文献第53-64页
攻读硕士学位期间发表的学术论文第64页

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