| 摘要 | 第1-10页 |
| ABSTRACT | 第10-11页 |
| 第一章 有机磷农药污染及其检测 | 第11-37页 |
| 1 有机磷农药的概述 | 第11-17页 |
| ·有机磷农药使用现状 | 第11-12页 |
| ·有机磷农药的分类 | 第12-13页 |
| ·有机磷农药的毒性问题 | 第13-14页 |
| ·有机磷农药的环境污染和残留问题 | 第14-16页 |
| ·土壤污染 | 第15页 |
| ·水体污染 | 第15-16页 |
| ·大气污染 | 第16页 |
| ·破坏生态平衡和生物多样性 | 第16页 |
| ·农药污染的防治措施 | 第16-17页 |
| 2 有机磷农药降解酶的研究进展 | 第17-29页 |
| ·有机磷农药降解微生物的分离 | 第17-19页 |
| ·有机磷水解酶的研究进展 | 第19-24页 |
| ·有机磷水解酶的基因定位和性质研究 | 第20-21页 |
| ·有机磷水解酶精细结构的研究 | 第21-24页 |
| ·甲基对硫磷水解酶的研究现状 | 第24-29页 |
| ·甲基对硫磷降解菌的分离和利用 | 第24-25页 |
| ·甲基对硫磷降解途径的研究 | 第25-26页 |
| ·甲基对硫磷降解基因及其水解酶的研究 | 第26-29页 |
| 3 农药残留检测的研究进展 | 第29-37页 |
| ·色谱法(Chromotography) | 第29-31页 |
| ·气相色谱法(Gas Chromatography,GC) | 第29-30页 |
| ·高效液相色谱法(High Performance Liquid Chromatography,HPLC) | 第30-31页 |
| ·薄层色谱法(Thin-layer chromatography,TLC) | 第31页 |
| ·毛细管电泳(Capillary Electropheresis) | 第31-32页 |
| ·光谱法 | 第32页 |
| ·生物传感器 | 第32-35页 |
| ·酶传感器 | 第33-34页 |
| ·微生物传感器 | 第34页 |
| ·免疫传感器 | 第34-35页 |
| ·纳米传感器 | 第35页 |
| ·结束语 | 第35-37页 |
| 第二章 甲基对硫磷水解酶的高酶活筛选研究 | 第37-59页 |
| 1 材料与方法 | 第38-50页 |
| ·材料 | 第38-42页 |
| ·菌株与质粒 | 第38-39页 |
| ·培养基及抗生素 | 第39-40页 |
| ·试剂与材料 | 第40页 |
| ·溶剂和缓冲溶液 | 第40-41页 |
| ·仪器与设备 | 第41-42页 |
| ·实验方法 | 第42-50页 |
| ·大肠杆菌质粒的提取 | 第42页 |
| ·mph基因的PCR扩增及表达载体构建 | 第42-43页 |
| ·大肠杆菌杆菌感受态细胞的制备及转化 | 第43页 |
| ·大肠杆菌的转化 | 第43页 |
| ·重组质粒的筛选、验证 | 第43-44页 |
| ·单酶切、双酶切验证 | 第44页 |
| ·MPH的诱导表达 | 第44页 |
| ·MPH粗酶的获得 | 第44-45页 |
| ·MPH的纯化 | 第45-46页 |
| ·蛋白质浓度的测定 | 第46页 |
| ·MPH酶学活性测定 | 第46页 |
| ·MPH酶动力学参数测定 | 第46页 |
| ·MPH的体外定向筛选 | 第46-50页 |
| 2 结果 | 第50-58页 |
| ·mph基因表达载体的构建 | 第50-53页 |
| ·mph基因的扩增 | 第52页 |
| ·pET20b(+)-mph重组质粒的验证 | 第52-53页 |
| ·MPH的表达纯化 | 第53-54页 |
| ·MPH的体外定向筛选试验设计和突变文库的筛选 | 第54-58页 |
| ·Error-prone PCR体系的设计 | 第54-55页 |
| ·突变文库的筛选 | 第55页 |
| ·突变株动力学性质分析 | 第55-56页 |
| ·保存稳定性的测定 | 第56-58页 |
| 3 小结 | 第58-59页 |
| 第三章 荧光纳米传感器检测甲基对硫磷的研究 | 第59-91页 |
| 1 材料与方法 | 第61-73页 |
| ·材料 | 第61-65页 |
| ·菌株和质粒 | 第61-62页 |
| ·培养基及抗生素 | 第62-63页 |
| ·试剂与材料 | 第63页 |
| ·溶剂和缓冲溶液 | 第63-64页 |
| ·仪器与设备 | 第64-65页 |
| ·实验方法 | 第65-73页 |
| ·大肠杆菌质粒的提取 | 第65页 |
| ·e~2gfp基因的PCR扩增及表达载体构建 | 第65-66页 |
| ·e~2gfp-mph基因片断克隆载体的构建 | 第66-68页 |
| ·e~2gfp-mph基因的PCR扩增及sup35~(1-61)-e~2gfp-mph基因克隆载体的构建 | 第68-69页 |
| ·MPH、E~2GFP、E~2GFP-MPH和Sup35~(1-61)-E~2GFP-MPH的诱导表达 | 第69页 |
| ·MPH、E~2GFP、E~2GFP-MPH和Sup35~(1-61)-E~2GFP-MPH的纯化 | 第69-70页 |
| ·蛋白质的聚丙烯酰胺凝胶电泳及透析 | 第70-71页 |
| ·蛋白质浓度的测定 | 第71页 |
| ·蛋白自主装成纳米线 | 第71页 |
| ·刚果红染色 | 第71页 |
| ·透射电镜表征 | 第71页 |
| ·MPH、E~2GFP-MPH和Sup35~(1-61)-E~2GFP-MPH nanowires酶学活性测定 | 第71-72页 |
| ·pH恒滴定 | 第72页 |
| ·E~2GFP-MPH、Sup35~(1-61)-E~2GFP-MPH荧光强度随pH值变化的测定 | 第72页 |
| ·利用E~2GFP-MPH和Sup35~(1-61)-E~2GFP-MPH nanowires检测MP | 第72-73页 |
| 2 结果 | 第73-88页 |
| ·几种融合蛋白基因表达载体的构建 | 第73-79页 |
| ·e~2gfp基因表达载体的构建 | 第73-74页 |
| ·e~2gfp-mph基因片断克隆载体的构建 | 第74-77页 |
| ·sup35~(1-61)-e~2gfp-mph基因片断克隆载体的构建 | 第77-79页 |
| ·几种融合蛋白的纯化 | 第79-81页 |
| ·恒pH滴定 | 第81页 |
| ·酶催化、反应体系pH值变化与荧光强度变化之间的相关性 | 第81-82页 |
| ·刚果红染色 | 第82-83页 |
| ·Sup35~(1-61)-E~2GFP-MPH纳米线的透射电镜表征 | 第83-84页 |
| ·MPH、E~2GFP-MPH和Sup35~(1-61)-E~2GFP-MPH成线蛋白酶学活性测定 | 第84-85页 |
| ·Sup35~(1-61)-E~2GFP-MPH成线蛋白荧光强度随pH值变化的测定 | 第85页 |
| ·利用E~2GFP-MPH、Sup35~(1-61)-E~2GFP-MPH成线蛋白检测MP | 第85-87页 |
| ·MPH-E~2GFP和Sup35~(1-61)-E~2GFP-MPH成线蛋白荧光强度残留随时间变化的比较 | 第87-88页 |
| 3 讨论 | 第88-90页 |
| ·一种新型的pH值敏感的荧光生物分子传感器的构建 | 第88-89页 |
| ·纳米自组装荧光生物分子传感器的构建 | 第89-90页 |
| 4 小结 | 第90-91页 |
| 参考文献 | 第91-103页 |
| 论文及专利 | 第103-104页 |
| 致谢 | 第104-105页 |
