摘要 | 第4-6页 |
abstract | 第6-8页 |
第1章 引言 | 第12-34页 |
1.1 黏膜免疫系统与IgA抗体 | 第12-22页 |
1.1.1 黏膜免疫系统与黏膜上表皮细胞 | 第12-13页 |
1.1.2 分泌型IgA(Secretory IgA)抗体 | 第13-14页 |
1.1.3 分泌型IgA抗体在黏膜上表皮细胞中的转运 | 第14-15页 |
1.1.4 分泌型IgA抗体重要功能 | 第15-17页 |
1.1.5 单克隆抗体技术与抗体转型 | 第17-21页 |
1.1.5.1 单克隆抗体技术与有限稀释法 | 第17-20页 |
1.1.5.2抗体类别转换 | 第20-21页 |
1.1.6 Transwell通透膜系统 | 第21-22页 |
1.2 麻疹病毒与病毒蛋白 | 第22-31页 |
1.2.1 麻疹病毒 | 第22-23页 |
1.2.2 麻疹病毒外在蛋白 | 第23-24页 |
1.2.3 麻疹病毒内在蛋白 | 第24-31页 |
1.3 论文的选题和意义 | 第31-34页 |
第2章 材料与方法 | 第34-54页 |
2.1 实验仪器、试剂和耗材 | 第34-41页 |
2.1.1 实验仪器 | 第34-35页 |
2.1.2 实验试剂 | 第35-37页 |
2.1.3 实验耗材 | 第37-38页 |
2.1.4 生物耗材 | 第38-39页 |
2.1.5 培养基、缓冲液以及溶液配方 | 第39-41页 |
2.2 实验方法 | 第41-54页 |
2.2.1 细胞传代,复苏,冻存 | 第41-43页 |
2.2.2 麻疹病毒培养 | 第43页 |
2.2.3 麻疹病毒滴度检测 | 第43页 |
2.2.4 Vero-pIgR细胞和Caco-2 细胞的培养以及Transwell系统的铺置 | 第43-44页 |
2.2.5 Western Blot检测蛋白含量 | 第44-45页 |
2.2.6 ELSIA | 第45页 |
2.2.7 经典中和实验 | 第45-46页 |
2.2.8 抗体胞内中和病毒实验 | 第46页 |
2.2.9 单克隆抗体制备 | 第46-48页 |
2.2.10 激光共聚焦观察蛋白共定位 | 第48-49页 |
2.2.11 质粒转染 | 第49-50页 |
2.2.12 免疫共沉淀 | 第50页 |
2.2.13 病毒RNA提取 | 第50-51页 |
2.2.14 荧光定量PCR | 第51-52页 |
2.2.15 统计学分析 | 第52-54页 |
第3章 实验结果 | 第54-98页 |
3.1 筛选得到两株针对麻疹病毒磷酸化蛋白特异性IgA抗体 | 第54-61页 |
3.1.1 检测麻疹病毒磷酸化蛋白特异性IgA抗体在细胞中转运效率 | 第54-55页 |
3.1.2 检测anti-P1D11-IgA和 anti-P7F1-IgA抗体在胞内特异性结合麻疹病毒P蛋白 | 第55-61页 |
3.2 麻疹病毒特异性IgA抗体通过识别P蛋白a-MoRE元件干扰P-N复合物的结构和功能从而抑制麻疹病毒的复制 | 第61-72页 |
3.2.1 检测anti-P1D11-IgA抗体胞内中和麻疹病毒效率 | 第61-65页 |
3.2.2 确定麻疹病毒P蛋白特异性IgA抗体anti-P1D11-IgA抗体在P蛋白上的结合位点 | 第65-68页 |
3.2.3 Anti-P1D11-IgA在 Vero-pIgR细胞中阻碍P蛋白与N蛋白的相互作用 | 第68-70页 |
3.2.4 Anti-P1D11-IgA抗体抑制麻疹病毒的转录和复制 | 第70-71页 |
3.2.5 Anti-P1D11-IgA抗体小结 | 第71-72页 |
3.3 麻疹病毒P蛋白特异性IgA抗体阻碍麻疹病毒逃逸宿主I型干扰素 | 第72-98页 |
3.3.1 anti-P7F1-IgA抗体在Vero-pIgR细胞中无法抑制麻疹病毒复制,而在Caco-2 细胞中可以抑制病毒复制 | 第72-74页 |
3.3.2 确认anti-P7F1-IgA抗体在麻疹病毒P蛋白上的特异性结合位点 | 第74-77页 |
3.3.3 anti-P7F1-IgA抗体在Caco-2 细胞中可以恢复I型干扰素的表达 | 第77-80页 |
3.3.4 anti-P7F1-IgA抗体阻碍麻疹病毒P蛋白与JAK1和STAT1 蛋白的结合 | 第80-84页 |
3.3.5 anti-P7F1-IgA在 Caco-2 细胞中可以恢复STAT1和JAK1 蛋白的磷酸化水平 | 第84-88页 |
3.3.6 anti-P7F1-IgA在 Caco-2 细胞中可以恢复STAT1 蛋白入核 | 第88-91页 |
3.3.7 anti-P7F1-IgA在 Caco-2 细胞阻碍麻疹病毒P蛋白与JAK1 蛋白和STAT1 蛋白结合。 | 第91-96页 |
3.3.8 anti-P7F1-IgA抗体小结 | 第96-98页 |
第4章 讨论 | 第98-102页 |
4.1 针对P-N复合物其他关键结构筛选特异性IgA抗体 | 第98-100页 |
4.2 针对麻疹病毒属其他病毒P23 位点筛选特异性IgA抗体 | 第100-101页 |
4.3 anti-P7F1-IgA抗体是否具有阻碍麻疹病毒V蛋白逃逸干扰素通路的功能 | 第101-102页 |
参考文献 | 第102-112页 |
致谢 | 第112-114页 |
作者简历及攻读学位期间发表的学术论文与研究成果 | 第114-115页 |