| 摘要 | 第3-4页 |
| abstract | 第4-5页 |
| 主要符号对照表 | 第10-11页 |
| 第1章 绪论 | 第11-30页 |
| 1.1 研究背景 | 第11-12页 |
| 1.2 国内外研究现状 | 第12-26页 |
| 1.2.1 生物滞留池中PAHs污染的来源及特征 | 第12-15页 |
| 1.2.2 环境中降解PAHs的微生物资源 | 第15-16页 |
| 1.2.3 PAHs的微生物降解机理 | 第16-21页 |
| 1.2.4 PAHs污染土壤的微生物修复 | 第21-26页 |
| 1.3 研究目的、内容与技术路线 | 第26-30页 |
| 1.3.1 研究意义与目的 | 第26-27页 |
| 1.3.2 研究内容 | 第27-29页 |
| 1.3.3 技术路线 | 第29-30页 |
| 第2章 生物滞留池中PAHs赋存特征及优势菌筛选 | 第30-48页 |
| 2.1 引言 | 第30页 |
| 2.2 实验材料与方法 | 第30-35页 |
| 2.2.1 采样点概况与样品采集 | 第30-32页 |
| 2.2.2 土壤中PAHs含量的测定 | 第32页 |
| 2.2.3 土壤样品的微生物群落结构分析 | 第32-34页 |
| 2.2.4 优势菌株的分离与鉴定 | 第34-35页 |
| 2.3 生物滞留池中PAHs的赋存特征及典型种类识别 | 第35-38页 |
| 2.4 生物滞留池中菌群结构多样性特征 | 第38-43页 |
| 2.5 土著优势菌的分离、鉴定及系统发育研究 | 第43-47页 |
| 2.6 本章小结 | 第47-48页 |
| 第3章 PAHs高效降解基因的筛选、克隆与鉴定 | 第48-64页 |
| 3.1 引言 | 第48页 |
| 3.2 实验材料与方法 | 第48-53页 |
| 3.2.1 菌株与质粒 | 第48-49页 |
| 3.2.2 试剂盒及常用试剂 | 第49-50页 |
| 3.2.3 Mycobacterium vanbaalenii PYR-1 对芘的降解能力测定 | 第50页 |
| 3.2.4 RHD基因在芘降解过程中的表达量测定 | 第50-52页 |
| 3.2.5 RHD基因的扩增与鉴定 | 第52-53页 |
| 3.3 Mycobacterium vanbaalenii PYR-1 对芘的降解能力 | 第53-55页 |
| 3.4 RHD基因在芘降解过程中的表达量变化 | 第55-60页 |
| 3.4.1 细菌总RNA的提取 | 第55-56页 |
| 3.4.2 RHD基因标准质粒与标准曲线 | 第56-57页 |
| 3.4.3 8段RHD基因的总体拷贝数比较 | 第57-58页 |
| 3.4.4 芘降解过程中RHD基因的表达量变化 | 第58-60页 |
| 3.5 典型RHD基因的克隆与鉴定 | 第60-62页 |
| 3.6 本章小结 | 第62-64页 |
| 第4章 土著菌的基因工程改造及PAHs降解能力的提升 | 第64-81页 |
| 4.1 引言 | 第64-65页 |
| 4.2 实验材料与方法 | 第65-69页 |
| 4.2.1 菌株与质粒 | 第65页 |
| 4.2.2 试剂盒及常用试剂 | 第65页 |
| 4.2.3 重组菌的构建与筛选 | 第65-68页 |
| 4.2.4 重组菌对芘的降解能力测定及代谢产物分析 | 第68-69页 |
| 4.3 具有指示功能的PAHs降解基因工程菌构建 | 第69-70页 |
| 4.3.1 降解基因RHD2与指示基因Gfp的融合 | 第69页 |
| 4.3.2 重组转座子载体p UT-RHDGfp的构建 | 第69-70页 |
| 4.4 具有指示功能的PAHs降解基因工程菌筛选 | 第70-74页 |
| 4.4.1 融合基因RHDGfp的定位与验证 | 第70-71页 |
| 4.4.2 基因工程菌的荧光、重组蛋白表达验证 | 第71-74页 |
| 4.5 重组菌对芘的降解特性研究 | 第74-79页 |
| 4.5.1 降解能力测定 | 第74-76页 |
| 4.5.2 代谢产物分析 | 第76-79页 |
| 4.6 本章小结 | 第79-81页 |
| 第5章 基因工程菌的安全性强化与稳定性研究 | 第81-96页 |
| 5.1 引言 | 第81-82页 |
| 5.2 实验材料与方法 | 第82-86页 |
| 5.2.1 菌株与质粒 | 第82页 |
| 5.2.2 试剂盒及常用试剂 | 第82页 |
| 5.2.3 ABC诱导自毁系统的构建与评估 | 第82-85页 |
| 5.2.4 基因工程菌的稳定性研究 | 第85-86页 |
| 5.3 基于诱导自毁系统构建的菌株安全性强化 | 第86-91页 |
| 5.3.1 lac启动子与核酸酶基因nuc的融合 | 第86-87页 |
| 5.3.2 重组转座子载体p UT-lacnuc的构建 | 第87-88页 |
| 5.3.3 融合基因lacnuc的定位与验证 | 第88-89页 |
| 5.3.4 ABC系统的诱导自毁效率研究 | 第89-91页 |
| 5.4 基因工程菌的稳定性研究 | 第91-94页 |
| 5.4.1 融合基因RHDGfp基因在染色体结构中的稳定性 | 第91-92页 |
| 5.4.2 基因工程菌人工传代的功能稳定性分析 | 第92-94页 |
| 5.5 本章小结 | 第94-96页 |
| 第6章 生物滞留池中PAHs的基因工程菌降解实验研究 | 第96-115页 |
| 6.1 引言 | 第96页 |
| 6.2 实验材料与方法 | 第96-98页 |
| 6.2.1 模拟生物滞留池的搭建 | 第96-97页 |
| 6.2.2 PAHs的基因工程菌降解实验设计 | 第97-98页 |
| 6.2.3 数据分析 | 第98页 |
| 6.3 模拟生物滞留池中芘的降解特性 | 第98-100页 |
| 6.4 RHD基因丰度的变化 | 第100-104页 |
| 6.5 微生物群落结构演变研究 | 第104-113页 |
| 6.5.1 模拟生物滞留池中的微生物多样性分析 | 第105-109页 |
| 6.5.2 微生物群落结构演变分析 | 第109-112页 |
| 6.5.3 接种降解菌相对丰度的变化 | 第112-113页 |
| 6.6 本章小结 | 第113-115页 |
| 第7章 结论与建议 | 第115-118页 |
| 7.1 结论 | 第115-116页 |
| 7.2 主要创新点 | 第116-117页 |
| 7.3 建议 | 第117-118页 |
| 参考文献 | 第118-133页 |
| 致谢 | 第133-135页 |
| 附录 | 第135-139页 |
| 1. RHD2基因序列（1984bp） | 第135-136页 |
| 2. RHDGfp基因序列（2695bp） | 第136-137页 |
| 3. nuc基因序列（741bp） | 第137-138页 |
| 4. lacnuc基因序列（886bp） | 第138-139页 |
| 个人简历、在学期间发表的学术论文与研究成果 | 第139-140页 |
