| 摘要 | 第10-12页 |
| Abstract | 第12-13页 |
| 第一章 综述 | 第14-31页 |
| 1.1 微生物表面展示系统研究现状 | 第14-23页 |
| 1.1.1 噬菌体表面展示系统 | 第14-15页 |
| 1.1.2 酵母表面展示系统 | 第15页 |
| 1.1.3 细菌表面展示系统 | 第15-23页 |
| 1.2 脂肪酶研究现状 | 第23-30页 |
| 1.2.1 脂肪酶 | 第23-24页 |
| 1.2.2 CALB(Candida Antarctica lipase B)来源及应用 | 第24-26页 |
| 1.2.3 CALB结构及催化性质 | 第26-28页 |
| 1.2.4 CALB作用机理 | 第28-29页 |
| 1.2.5 CALB表面展示重组菌的表达 | 第29-30页 |
| 1.3 选题意义及研究内容 | 第30-31页 |
| 第二章 材料与方法 | 第31-47页 |
| 2.1 实验材料与仪器 | 第31-35页 |
| 2.1.1 主要试剂与仪器 | 第31页 |
| 2.1.2 菌种、质粒和引物 | 第31-32页 |
| 2.1.3 培养基 | 第32-33页 |
| 2.1.4 标准溶液 | 第33-35页 |
| 2.2 CALB的重组质粒的构建 | 第35-43页 |
| 2.2.1 Simple Cloning方法的原理 | 第35-36页 |
| 2.2.2 目的片段及载体片段的线性化PCR | 第36-38页 |
| 2.2.3 琼脂糖凝胶电泳 | 第38页 |
| 2.2.4 DNA纯化 | 第38-39页 |
| 2.2.5 POE-PCR | 第39-40页 |
| 2.2.6 化学法感受态的制备 | 第40页 |
| 2.2.7 POE-PCR重组多聚体的化学转化 | 第40-41页 |
| 2.2.8 提取质粒 | 第41页 |
| 2.2.9 验证 | 第41-42页 |
| 2.2.10 保种 | 第42-43页 |
| 2.3 重组菌的表达与表征分析 | 第43-44页 |
| 2.3.1 重组菌的表达 | 第43页 |
| 2.3.2 SDS-PAGE电泳 | 第43页 |
| 2.3.3 验证表面展示的方法 | 第43-44页 |
| 2.4 摇瓶发酵 | 第44页 |
| 2.5 分析方法 | 第44-47页 |
| 2.5.1 生物量检测 | 第44页 |
| 2.5.2 CALB酶活测定与分析方法 | 第44-47页 |
| 第三章 重组质粒的构建与重组菌的表达 | 第47-62页 |
| 3.1 引言 | 第47页 |
| 3.2 CALB重组质粒构建 | 第47-53页 |
| 3.3 CALB的重组菌的表达 | 第53-57页 |
| 3.4 CALB表面展示的证明 | 第57-58页 |
| 3.5 CALB活性检测分析 | 第58-61页 |
| 3.5.1 CALB的定性测定分析 | 第58-59页 |
| 3.5.2 表面展示CALB的水解活力测定分析 | 第59-61页 |
| 3.6 小结 | 第61-62页 |
| 第四章 重组大肠杆菌摇瓶发酵生产CALB的条件优化 | 第62-77页 |
| 4.1 引言 | 第62页 |
| 4.2 大肠杆菌摇瓶发酵培养基成分的优化 | 第62-70页 |
| 4.2.1 摇瓶发酵基础培养基的选择 | 第62-64页 |
| 4.2.2 碳源对表达CALB的影响 | 第64-65页 |
| 4.2.3 氮源对表达CALB的影响 | 第65-69页 |
| 4.2.4 MgSO_4对表达CALB的影响 | 第69页 |
| 4.2.5 混合微量元素对表达CALB的影响 | 第69-70页 |
| 4.3 大肠杆菌摇瓶发酵条件的优化 | 第70-76页 |
| 4.3.1 加诱导剂时机对表达CALB的影响 | 第70-71页 |
| 4.3.2 诱导时间对表达CALB的影响 | 第71-72页 |
| 4.3.3 诱导剂浓度对表达CALB的影响 | 第72-73页 |
| 4.3.4 诱导温度对表达CALB的影响 | 第73页 |
| 4.3.5 培养基初始pH对表达CALB的影响 | 第73-74页 |
| 4.3.6 接种量对表达CALB的影响 | 第74-75页 |
| 4.3.7 培养基体积对表达CALB的影响 | 第75-76页 |
| 4.4 小结 | 第76-77页 |
| 第五章 总结与展望 | 第77-79页 |
| 5.1 总结 | 第77-78页 |
| 5.2 展望 | 第78-79页 |
| 参考文献 | 第79-86页 |
| 附录 | 第86-91页 |
| 附录一 主要试剂 | 第86-89页 |
| 附录二 主要仪器 | 第89-90页 |
| 附录三 本研究所用引物 | 第90页 |
| 附录四 pET28a-Ag43'-WT-CALB/BL21(DE3)的生长曲线 | 第90-91页 |
| 致谢 | 第91页 |
