| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-8页 |
| 第一章 绪论 | 第8-14页 |
| ·1,3-丙二醇概况 | 第8页 |
| ·1,3-丙二醇的基本概况 | 第8页 |
| ·1,3-丙二醇的理化性质 | 第8页 |
| ·1,3-丙二醇合成方法 | 第8-9页 |
| ·化学合成法 | 第8页 |
| ·生物合成法 | 第8-9页 |
| ·微生物发酵法生产1,3-丙二醇及其进展 | 第9-10页 |
| ·微生物发酵法生产1,3-丙二醇的菌种 | 第9页 |
| ·1,3-丙二醇微生物转化路径及其关键酶 | 第9-10页 |
| ·微生物发酵工艺的研究进展 | 第10-11页 |
| ·以甘油为底物的发酵 | 第10-11页 |
| ·以葡萄糖为底物的发酵 | 第11页 |
| ·发酵方式的研究进展 | 第11页 |
| ·构建基因工程菌方法生产1,3-丙二醇 | 第11页 |
| ·1,3-丙二醇的生产现状 | 第11-12页 |
| ·立体背景及本论文研究内容 | 第12-14页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第14-20页 |
| ·实验材料 | 第14-15页 |
| ·实验仪器 | 第14页 |
| ·质粒和菌株 | 第14页 |
| ·主要化学试剂(盒)及工具酶 | 第14页 |
| ·PCR引物 | 第14-15页 |
| ·培养基 | 第15页 |
| ·实验方法 | 第15-20页 |
| ·E.coli k-12菌基因组DNA提取 | 第15页 |
| ·腺苷钴胺素合成酶基因cobs的PCR扩增 | 第15-16页 |
| ·PCR产物的电泳分离及胶回收 | 第16页 |
| ·质粒DNA的提取 | 第16页 |
| ·感受态大肠杆菌的制备 | 第16-17页 |
| ·转化感受态大肠杆菌 | 第17页 |
| ·重组载体pEtac-cobs-tac-dhaB-tac-yqhD的构建 | 第17页 |
| ·培养方法 | 第17页 |
| ·SDS-PAGE电泳 | 第17-18页 |
| ·甘油脱水酶的酶活力测定 | 第18页 |
| ·检测方法 | 第18页 |
| ·重组K.pneumoniae(pEtac-cobs-tac-dhaB-tac-yqhD)的遗传稳定性 | 第18-20页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第20-40页 |
| ·腺苷钴胺素合成酶基因cobs的扩增 | 第20页 |
| ·表达载体pEtac-cobs-tac-dhaB-tac-yqhD的构建 | 第20-24页 |
| ·表达载体pEtac-cobs-tac-dhaB-tac-yqhD的构建过程 | 第20-22页 |
| ·重组载体pEtac-cobs的构建 | 第22页 |
| ·表达载体pEtac-cobs-tac-dhaB-tac-yqhD的构建 | 第22-24页 |
| ·重组K pneumoniae全细胞蛋白SDS-PAGE电泳分析 | 第24-25页 |
| ·原始菌与重组K. pneumoniae(pEtac-cobs-tac-dhaB-tac-yqhD)甘油脱水酶活性测定 | 第25-26页 |
| ·重组K.pneumoniae(pEtac-cobs-tac-dhaB-tac-yqhD)的遗传稳定性 | 第26-27页 |
| ·重组K.Pneumoniae(pEtac-cobs-tac-dhaB-tac-yqhD)发酵特性的研究 | 第27-29页 |
| ·重组K.Pneumoniae与原始菌在不同浓度的VB_(12)条件下发酵的比较 | 第27-28页 |
| ·重组K.pneumoniae(pEtac-cobs-tac-dhaB-tac-yqhD)生产1,3-PD的发酵过程 | 第28-29页 |
| ·重组K.pneumoniae(pEtac-cobs-tac-dhaB-tac-yqhD)的发酵优化 | 第29-38页 |
| ·不同氮源对发酵结果的影响 | 第29-30页 |
| ·初始甘油浓度对发酵结果的影响 | 第30页 |
| ·Mg~(2+)浓度对发酵结果的影响 | 第30-31页 |
| ·添加辅助碳源葡萄糖对发酵结果的影响 | 第31-32页 |
| ·接种量对发酵结果的影响 | 第32页 |
| ·添加不同浓度的ATP对发酵结果的影响 | 第32-33页 |
| ·搅拌速度对发酵结果的影响 | 第33-34页 |
| ·正交试验设计优化 | 第34-36页 |
| ·优化后重组K.pneumoniae与原始菌的发酵比较 | 第36-38页 |
| ·主要结论 | 第38-39页 |
| ·课题展望 | 第39-40页 |
| 致谢 | 第40-42页 |
| 参考文献 | 第42-46页 |
| 附录:作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第46页 |
