| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 第一章 绪论 | 第14-22页 |
| 1.1 木质纤维素简介及其应用现状 | 第14-15页 |
| 1.2 纤维素及纤维素酶 | 第15-17页 |
| 1.2.1 纤维素 | 第15-16页 |
| 1.2.2 纤维素酶 | 第16-17页 |
| 1.3 木聚糖及木聚糖酶 | 第17-18页 |
| 1.3.1 木聚糖 | 第17页 |
| 1.3.2 木聚糖酶 | 第17-18页 |
| 1.4 木质纤维素水解酶的协同作用 | 第18-19页 |
| 1.5 基因共表达策略 | 第19-20页 |
| 1.5.1 单个启动子启动的多基因表达 | 第19页 |
| 1.5.2 多启动子启动的多基因表达 | 第19页 |
| 1.5.3 两个质粒在酿酒酵母中共转化表达 | 第19-20页 |
| 1.6 本研究的目的及意义 | 第20-22页 |
| 第二章 材料与方法 | 第22-33页 |
| 2.1 实验材料 | 第22-24页 |
| 2.1.1 质粒与菌株 | 第22页 |
| 2.1.2 培养基 | 第22-23页 |
| 2.1.3 试剂和酶 | 第23页 |
| 2.1.4 主要缓冲液 | 第23页 |
| 2.1.5 仪器和设备 | 第23-24页 |
| 2.2 实验方法 | 第24-33页 |
| 2.2.1 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第24页 |
| 2.2.2 大肠杆菌的常规转化 | 第24-25页 |
| 2.2.3 大肠杆菌的快速转化 | 第25页 |
| 2.2.4 SDS碱法抽提质粒 | 第25-26页 |
| 2.2.5 目的基因的扩增 | 第26-27页 |
| 2.2.6 重组表达载体的构建 | 第27页 |
| 2.2.7 酿酒酵母感受态的制备 | 第27-28页 |
| 2.2.8 酿酒酵母电击转化 | 第28页 |
| 2.2.9 酿酒酵母重组菌的平板筛选 | 第28-29页 |
| 2.2.10 DNS还原糖显色法测定还原糖浓度 | 第29-32页 |
| 2.2.11 玉米秸秆的预处理 | 第32页 |
| 2.2.12 酿酒酵母重组菌株利用玉米秸秆为唯一碳源的生长实验 | 第32页 |
| 2.2.13 重组酿酒酵母利用玉米秸秆为唯一碳源无氧发酵实验 | 第32-33页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第33-48页 |
| 3.1 载体构建 | 第33-39页 |
| 3.1.1 亮氨酸筛选标记的克隆 | 第33页 |
| 3.1.2 纤维素酶表达载体pHBM-368-PGK-CBH-LEU构建 | 第33-34页 |
| 3.1.3 纤维素酶表达载体pHBM-368-PGK-CBH-LEU)验证 | 第34-35页 |
| 3.1.4 木聚糖酶表达载体pHBM-368-PGK-TS-LEU的构建 | 第35-36页 |
| 3.1.5 木聚糖酶表达载体pHBM-368-PGK-TS-LEU的酶切验证 | 第36-37页 |
| 3.1.6 木聚糖酶表达载体pHBM-368-PGK-CA-LEU的构建 | 第37-38页 |
| 3.1.7 木聚糖酶表达载体pHBM-368-PGK-CA-LEU的酶切验证 | 第38-39页 |
| 3.2 酿酒酵母混合质粒电击转化 | 第39-40页 |
| 3.2.1 纤维素酶表达载体与木聚糖表达载体的混合 | 第39页 |
| 3.2.2 混合质粒电击转化 | 第39-40页 |
| 3.3 酿酒酵母重组菌的功能筛选 | 第40-42页 |
| 3.3.1 重组S.cerevisiae INVSc-CBH-TS的功能筛选 | 第40-42页 |
| 3.3.2 重组S.cerevisiae INVSc-CBH-CA的功能筛选 | 第42页 |
| 3.4 酿酒酵母重组菌表达纤维素酶与木聚糖酶酶活测定 | 第42-43页 |
| 3.5 酿酒酵母重组菌利用预处理玉米秸秆作为唯一碳源生长 | 第43-45页 |
| 3.5.1 重组S.cerevisiae INVSc-CBH-TS生长 | 第43页 |
| 3.5.2 重组S.cerevisiae INVSc-CBH-CA生长 | 第43-44页 |
| 3.5.3 酿酒酵母重组菌生长与非重组酿酒酵母对比 | 第44-45页 |
| 3.6 酿酒酵母重组菌利用预处理玉米秸秆作为唯一碳源进行无氧发酵 | 第45-48页 |
| 3.6.1 重组S.cerevisiae INVSc-CBH-TS产乙醇 | 第45页 |
| 3.6.2 重组S.cerevisiae INVSc-CBH-CA产乙醇 | 第45-46页 |
| 3.6.3 酿酒酵母重组菌产乙醇情况与非重组酿酒酵母对比 | 第46-48页 |
| 第四章 结论与展望 | 第48-50页 |
| 4.1 结论 | 第48页 |
| 4.2 展望 | 第48-50页 |
| 参考文献 | 第50-58页 |
| 致谢 | 第58页 |
