| 摘要 | 第7-10页 |
| ABSTRACT | 第10-13页 |
| 缩略语 | 第14-16页 |
| 第一章 文献综述 | 第16-38页 |
| 1.1高等植物雄配子体的发育 | 第16-19页 |
| 1.1.1 小孢子发生(microsporogenesis) | 第16-17页 |
| 1.1.2 雄配子体发生(male gametogenesis) | 第17-18页 |
| 1.1.3 花粉水合(Hydration)、萌发及花粉管的生长 | 第18-19页 |
| 1.2 花粉萌发及花粉管生长的分子机制 | 第19-26页 |
| 1.2.1 细胞壁在花粉萌发和花粉管生长中的作用 | 第20-21页 |
| 1.2.2 细胞骨架在花粉萌发和花粉管生长中的作用 | 第21-23页 |
| 1.2.3 花粉萌发和花粉管生长中的信号转导 | 第23-26页 |
| 1.3 囊泡运输在花粉萌发和花粉管生长中的作用 | 第26-30页 |
| 1.3.1 囊泡运输的基本过程 | 第26-28页 |
| 1.3.2 外泌途径 | 第28-29页 |
| 1.3.3 内吞途径 | 第29-30页 |
| 1.4 Exocyst复合体 | 第30-35页 |
| 1.4.1 酵母和动物细胞中Exocyst复合体研究进展 | 第31-33页 |
| 1.4.2 植物中Exocyst复合体研究进展 | 第33-35页 |
| 1.5 本论文的立题依据及研究目的 | 第35-38页 |
| 第二章 材料与方法 | 第38-56页 |
| 2.1 实验材料 | 第38-39页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第38页 |
| 2.1.2 菌株及质粒载体 | 第38页 |
| 2.1.3 酶、试剂及各种化学药品 | 第38-39页 |
| 2.2 实验仪器 | 第39页 |
| 2.3 实验方法 | 第39-56页 |
| 2.3.1 拟南芥的栽培与管理 | 第39-40页 |
| 2.3.2 拟南芥总DNA的快速提取(Edwards法) | 第40页 |
| 2.3.3 拟南芥RNA的提取及第一链cDNA的合成 | 第40-42页 |
| 2.3.4 引物设计及PCR扩增 | 第42页 |
| 2.3.5 PCR扩增产物的回收 | 第42-43页 |
| 2.3.6 限制性内切酶反应 | 第43页 |
| 2.3.7 DNA片段的连接 | 第43页 |
| 2.3.8 大肠杆菌感受态的制备 | 第43-44页 |
| 2.3.9 大肠杆菌质粒提取 | 第44-45页 |
| 2.3.10 农杆菌感受态的制备 | 第45页 |
| 2.3.11 农杆菌的转化 | 第45页 |
| 2.3.12 农杆菌浸染拟南芥 | 第45-46页 |
| 2.3.13 抗性植株的筛选 | 第46页 |
| 2.3.14 本实验所需要的克隆载体的构建 | 第46-48页 |
| 2.3.15 GUS染色 | 第48页 |
| 2.3.16 拟南芥的人工杂交 | 第48-49页 |
| 2.3.17 DAPI染色 | 第49页 |
| 2.3.18 Alexander染色 | 第49-50页 |
| 2.3.19 花粉体外液体萌发 | 第50页 |
| 2.3.20 花粉体外固体萌发 | 第50-51页 |
| 2.3.21 花粉体内萌发及苯胺蓝染色观察 | 第51页 |
| 2.3.22 扫描电子显微镜观察拟南芥花粉 | 第51页 |
| 2.3.23 碘染 | 第51-52页 |
| 2.3.24 蛋白表达小试 | 第52页 |
| 2.3.25 HIS融合蛋白的纯化 | 第52-53页 |
| 2.3.26 HIS蛋白与脂质结合实验 | 第53-54页 |
| 2.3.27 LatB处理花粉管观察 | 第54页 |
| 2.3.28 拟南芥花粉体外萌发的苯胺蓝染色、Calcofluor和钌红染色 | 第54页 |
| 2.3.29 根向重力性测量 | 第54-56页 |
| 第三章 实验结果 | 第56-80页 |
| 3.1 拟南芥中含有两个SEC3基因 | 第56-57页 |
| 3.2 SEC3基因的表达分析 | 第57-58页 |
| 3.2.1 基因表达数据库数据分析 | 第57页 |
| 3.2.2 SEC3组织表达分析 | 第57-58页 |
| 3.2 sec3a突变导致拟南芥雄配子体不育 | 第58-61页 |
| 3.2.1 sec3a/+突变体的鉴定 | 第58-59页 |
| 3.2.2 sec3a/+突变体的遗传分析 | 第59-61页 |
| 3.3 sec3a突变花粉不能萌发 | 第61-64页 |
| 3.3.1 sec3a突变花粉粒发育正常 | 第61页 |
| 3.3.2 sec3a突变花粉不能正常萌发 | 第61-64页 |
| 3.4 SEC3A能够回补sec3a/+突变体的表型 | 第64-66页 |
| 3.4.1 SEC3A回补sec3a/+突变体可得到纯合体植株 | 第64页 |
| 3.4.2 花粉特异表达SEC3A可以回补sec3a花粉不能萌发的缺陷 | 第64-66页 |
| 3.5 SEC3A基因的表达及在花粉中的亚细胞定位 | 第66-68页 |
| 3.5.1 SEC3A基因在花粉中强表达 | 第66-67页 |
| 3.5.2 SEC3A蛋白定位在花粉萌发孔 | 第67-68页 |
| 3.6 sec3a突变不影响花粉的水合过程 | 第68-69页 |
| 3.7 sec3a突变花粉中组成花粉管壁的多糖物质无法在萌发孔处积累 | 第69-71页 |
| 3.8 SEC3A与磷脂互作研究 | 第71-73页 |
| 3.8.1 SEC3A与脂质结合 | 第71页 |
| 3.8.2 PI(4,5)P2的减少不影响SEC3A在萌发孔处的极性定位 | 第71-73页 |
| 3.9 SEC3A极性定位在花粉管顶端并且其极性定位依赖于细胞骨架 | 第73-74页 |
| 3.9.1 SEC3A极性定位在花粉管顶端 | 第73页 |
| 3.9.2 SEC3A在花粉管中的极性定位依赖于细胞骨架 | 第73-74页 |
| 3.10 PRsec3a突变体根冠小柱细胞层缺失、向重力性存在缺陷 | 第74-80页 |
| 3.10.1 SEC3A在植物组织中广谱表达 | 第74-75页 |
| 3.10.2 PRsec3a突变体生长素积累受到影响 | 第75-76页 |
| 3.10.3 PRsec3a突变体表现出向重力性缺失 | 第76页 |
| 3.10.4 PRsec3a突变体胚胎发育及植株其他器官生长没有明显异常 | 第76-80页 |
| 全文讨论 | 第80-82页 |
| 全文总结以及研究的创新之处 | 第82-84页 |
| 参考文献 | 第84-96页 |
| 附录 | 第96-100页 |
| 在读期间发表的论文 | 第100-102页 |
| 致谢 | 第102页 |
