| 中文摘要 | 第4-14页 |
| abstract | 第14-18页 |
| 英文缩略词 | 第24-26页 |
| 文献综述 | 第26-30页 |
| 第1章 miR-221以及PTEN在肝外胆管癌组织、细胞系中的表达情况和二者关系的研究,并深入探讨二者在肝外胆管癌发生、发展、侵袭转移中的作用机制 | 第30-80页 |
| 前言 | 第30-34页 |
| 第1节 miR-221及其下游基因PTEN、β-catenin、c-Jun在肝外胆管癌组织和细胞系中的表达情况 | 第34-52页 |
| 材料和方法 | 第34-47页 |
| 1 研究对象 | 第34页 |
| 1.1 肝外胆管癌及癌旁组织标本 | 第34页 |
| 1.2 细胞系 | 第34页 |
| 2 仪器设备与实验试剂 | 第34-37页 |
| 2.1 主要实验仪器 | 第34-36页 |
| 2.2 主要试剂与耗材 | 第36-37页 |
| 3 实验方法 | 第37-47页 |
| 3.1 主要溶液的配制 | 第37-38页 |
| 3.2 细胞培养 | 第38页 |
| 3.3 细胞复苏 | 第38页 |
| 3.4 细胞冻存 | 第38-39页 |
| 3.5 PCR引物设计合成 | 第39-40页 |
| 3.6 miR-221mimics和miR-221反义核酸的合成 | 第40页 |
| 3.7 RNA的提取及逆转录 | 第40-42页 |
| 3.8 瞬时转染miR-221的成熟体(mimics)和抑制子(inhibitor) | 第42页 |
| 3.9 荧光素酶实验报告基因活性测定 | 第42页 |
| 3.10 蛋白免疫印迹分析(westernBlot) | 第42-46页 |
| 3.11 统计学方法 | 第46-47页 |
| 结果 | 第47-52页 |
| 1 肝外胆管癌组织、癌旁组织以及胆管癌细胞系中miR-221的表达水平 | 第47-48页 |
| 1.1 肝外胆管癌组织和癌旁组织组中miR-221表达水平的比较 | 第47页 |
| 1.2 正常胆管上皮细胞以及胆管癌细胞系中miR-221表达水平的比较 | 第47-48页 |
| 2 肝外胆管癌组织、癌旁组织中PTEN、β-catenin、c-Jun的表达水平及其与miR-221的关系 | 第48-52页 |
| 2.1 肝外胆管癌组织和癌旁组织组中PTEN、β-catenin、c-Jun表达水平的比较 | 第48-50页 |
| 2.2 肝外胆管癌中miR-221表达水平与PTEN的关系 | 第50-51页 |
| 2.3 肝外胆管癌中miR-221表达水平与患者预后明显相关,是肝外胆管癌的独立预后因素 | 第51-52页 |
| 第2节 miR-221在肝外胆管癌细胞系中靶向调控下游基因PTEN | 第52-66页 |
| 材料和方法 | 第52-62页 |
| 1 研究对象 | 第52页 |
| 2 仪器设备与实验试剂 | 第52-54页 |
| 2.1 主要实验仪器 | 第52-53页 |
| 2.2 主要试剂与耗材 | 第53-54页 |
| 3 实验方法 | 第54-62页 |
| 3.1 肝外胆管癌细胞系QBC939和HuCCT1的培养 | 第54页 |
| 3.2 质粒重组、转化、抽提和鉴定 | 第54-58页 |
| 3.4 突变质粒的合成、转化和鉴定 | 第58-60页 |
| 3.5 质粒的转染 | 第60页 |
| 3.6 荧光素酶报告实验 | 第60-61页 |
| 3.7 总RNA的提取以及脂质体转染后细胞系中miR-221表达水平的检测 | 第61页 |
| 3.8 总蛋白的提取和蛋白质的浓度测定 | 第61页 |
| 3.9 WesternBlot检测PTEN蛋白的表达情况 | 第61页 |
| 3.10 统计学方法 | 第61-62页 |
| 实验结果 | 第62-66页 |
| 1 基因软件预测miR-221下游靶基因 | 第62页 |
| 2 qRT-PCR检测miR-221inhibitor转染后miR-221在胆管癌细胞系中表达情况 | 第62-63页 |
| 3 双荧光素酶报告实验验证PTEN是miR-221的下游靶基因之一 | 第63-64页 |
| 4 抑制miR-221表达对肝外胆管癌细胞系中PTEN蛋白表达的影响 | 第64-66页 |
| 第3节 miR-221通过抑制PTEN表达诱导肝外胆管癌细胞上皮间质转化,促进肝外胆管癌侵袭转移 | 第66-74页 |
| 材料和方法 | 第66-71页 |
| 1 研究对象 | 第66页 |
| 2 实验仪器与试剂 | 第66-68页 |
| 2.1 主要实验仪器 | 第66-67页 |
| 2.2 主要试剂与耗材 | 第67-68页 |
| 3 实验方法 | 第68-71页 |
| 3.1 肝外胆管癌细胞系QBC939和HuCCT1的培养 | 第68页 |
| 3.2 miR-221inhibitor的转染 | 第68-69页 |
| 3.3 蛋白质的提取 | 第69页 |
| 3.4 westernblot检测相关蛋白质的表达情况 | 第69页 |
| 3.5 miR-221对胆管癌细胞侵袭能力的影响 | 第69-70页 |
| 3.6 统计学方法 | 第70-71页 |
| 结果 | 第71-74页 |
| 1 miR-221直接抑制PTEN表达促进肝外胆管癌侵袭转移 | 第71-72页 |
| 2 miR-221直接抑制PTEN表达促进肝外胆管上皮间质转化 | 第72-74页 |
| 讨论 | 第74-80页 |
| 第2章 β-catenin/c-Jun通路在miR-221调节肝外胆管癌侵袭转移过程中发挥作用的研究 | 第80-100页 |
| 前言 | 第80-84页 |
| 第1节 β-catenin/c-Jun信号通路参与miR-221诱导肝外胆管癌细胞上皮间质转化,促进肝外胆管癌侵袭转移 | 第84-90页 |
| 材料和方法 | 第84-87页 |
| 1 研究对象 | 第84页 |
| 2 实验仪器与试剂 | 第84-85页 |
| 3 实验方法 | 第85-87页 |
| 3.1 肝外胆管癌细胞系QBC939和HuCCT1的培养 | 第85页 |
| 3.2 miR-221inhibitor的转染 | 第85页 |
| 3.3 蛋白质的提取 | 第85-86页 |
| 3.4 western blot检测相关蛋白质的表达情况 | 第86页 |
| 3.5 miR-221对胆管癌细胞侵袭能力的影响 | 第86页 |
| 3.6 统计学方法 | 第86-87页 |
| 结果 | 第87-90页 |
| 1 miR-221激活β-catenin/c-Jun信号通路促进肝外胆管癌侵袭转移 | 第87-88页 |
| 2 β-catenin/c-Jun信号通路参与miR-221诱导肝外胆管癌细胞上皮间质转化,促进肝外胆管癌侵袭转移 | 第88-90页 |
| 第2节 β-catenin/c-Jun信号通路促进miR-221的表达 | 第90-96页 |
| 材料和方法 | 第90-94页 |
| 1 研究对象 | 第90页 |
| 2 实验仪器与试剂 | 第90-92页 |
| 2.1 主要实验仪器 | 第90-91页 |
| 2.2 主要试剂与耗材 | 第91-92页 |
| 3 实验方法 | 第92-94页 |
| 3.1 肝外胆管癌细胞系QBC939和HuCCT1的培养 | 第92页 |
| 3.2 蛋白质的提取 | 第92-93页 |
| 3.3 western blot检测相关蛋白质的表达情况 | 第93页 |
| 3.4 qRT-PCR检测miR-221表达 | 第93页 |
| 3.5 统计学方法 | 第93-94页 |
| 实验结果 | 第94-96页 |
| 1 sic-Jun使c-Jun蛋白表达降低,BIO激活c-Jun表达 | 第94页 |
| 2 β-catenin/c-Jun信号转导通路促进miR-221的表达 | 第94-96页 |
| 讨论 | 第96-100页 |
| 第3章 结论 | 第100-102页 |
| 参考文献 | 第102-116页 |
| 个人简介 | 第116-118页 |
| 致谢 | 第118页 |
