| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4页 |
| 第一章 绪论 | 第7-16页 |
| 1.1 Monellin(甜味蛋白)概述 | 第7-8页 |
| 1.1.1 甜味剂简介 | 第7页 |
| 1.1.2 Monellin简介与研究进展 | 第7-8页 |
| 1.2 毕赤酵母表达系统概述 | 第8-10页 |
| 1.2.1 毕赤酵母表达系统发展历史 | 第8页 |
| 1.2.2 毕赤酵母表达系统简介 | 第8-10页 |
| 1.3 毕赤酵母外源蛋白表达控制策略 | 第10-14页 |
| 1.3.1 甘油流加控制策略 | 第10-11页 |
| 1.3.2 甲醇诱导控制策略 | 第11-13页 |
| 1.3.3 毕赤酵母表达外源蛋白过程中碳代谢与能量代谢 | 第13-14页 |
| 1.4 本论文主要内容 | 第14-16页 |
| 第二章 材料与方法 | 第16-20页 |
| 2.1 实验仪器与设备 | 第16页 |
| 2.2 实验菌株 | 第16页 |
| 2.3 培养基 | 第16-17页 |
| 2.4 培养方法 | 第17页 |
| 2.4.1 菌种活化方法 | 第17页 |
| 2.4.2 种子培养方法 | 第17页 |
| 2.4.3 5L发酵罐中分批补料培养毕赤酵母并诱导表达monellin | 第17页 |
| 2.5 分析方法 | 第17-20页 |
| 2.5.1 细胞浓度与细胞干重的测定 | 第17-18页 |
| 2.5.2 甲醇浓度与乙醇浓度的在线测量 | 第18页 |
| 2.5.3 甲醇浓度与乙醇浓度的离线测量 | 第18页 |
| 2.5.4 甲醛浓度与甲酸浓度的测定 | 第18页 |
| 2.5.5 O_2消耗速率和CO_2释放速率的测定 | 第18页 |
| 2.5.6 总蛋白浓度的测定 | 第18页 |
| 2.5.7 Monellin浓度的测定 | 第18页 |
| 2.5.8 细胞生长/甲醇消耗/monellin合成速率的计算 | 第18-19页 |
| 2.5.9 甲醇代谢过程中关键酶活性的测定 | 第19-20页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第20-38页 |
| 3.1 不同诱导策略下毕赤酵母表达monellin的发酵性能 | 第20-25页 |
| 3.1.1 不同诱导策略下毕赤酵母发酵生产monellin的性能 | 第20-22页 |
| 3.1.2 低细胞浓度下启动甲醇诱导促进monellin表达 | 第22-23页 |
| 3.1.3 诱导期通纯氧策略下毕赤酵母发酵生产monellin的性能 | 第23-25页 |
| 3.2 毕赤酵母表达monellin过程中碳/能量代谢与关键酶分析 | 第25-32页 |
| 3.2.1 毕赤酵母表达monellin过程中碳代谢模式 | 第25-27页 |
| 3.2.2 毕赤酵母表达monellin过程中能量利用效率及影响因素 | 第27-32页 |
| 3.3 甲醇/山梨醇共混策略下毕赤酵母表达monellin的性能 | 第32-33页 |
| 3.4 低细胞浓度下启动甲醇诱导促进外源蛋白表达的通用能力 | 第33-38页 |
| 3.4.1 毕赤酵母表达HSA-FGF21过程中发酵性能 | 第33-34页 |
| 3.4.2 毕赤酵母表达HSA-FGF21过程中碳代谢模式和能量利用效率 | 第34-38页 |
| 主要结论与展望 | 第38-39页 |
| 主要结论 | 第38页 |
| 展望 | 第38-39页 |
| 致谢 | 第39-40页 |
| 参考文献 | 第40-45页 |
| 附录:作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第45页 |
