| 摘要 | 第5-6页 |
| abstract | 第6页 |
| 第一章 引言 | 第11-24页 |
| 1.1 牛支原体的致病机理研究进展 | 第11-21页 |
| 1.1.1 牛支原体概述及生物学特性 | 第11-12页 |
| 1.1.2 膜表面抗原高频率变异 | 第12-13页 |
| 1.1.3 黏附宿主细胞 | 第13-16页 |
| 1.1.4 入侵宿主细胞 | 第16-17页 |
| 1.1.5 形成生物膜 | 第17-18页 |
| 1.1.6 规避吞噬细胞吞噬作用 | 第18页 |
| 1.1.7 与宿主竞争代谢底物 | 第18-19页 |
| 1.1.8 与其他致病微生物的协同感染 | 第19页 |
| 1.1.9 调节宿主免疫应答 | 第19-21页 |
| 1.2 牛支原体遗传操作技术 | 第21-22页 |
| 1.2.1 转座子突变技术 | 第21-22页 |
| 1.2.2 牛支原体的自我复制型质粒 | 第22页 |
| 1.3 本实验的研究目的及意义 | 第22-24页 |
| 第二章 牛支原体08M株突变体文库的构建 | 第24-30页 |
| 2.1 实验材料 | 第24-25页 |
| 2.1.1 菌株及质粒载体 | 第24页 |
| 2.1.2 主要材料及试剂 | 第24页 |
| 2.1.3 主要溶液的配制 | 第24页 |
| 2.1.4 培养基的配制 | 第24页 |
| 2.1.5 主要仪器 | 第24-25页 |
| 2.2 试验方法 | 第25-26页 |
| 2.2.1 08 M株对Gm的MIC测定 | 第25页 |
| 2.2.2 电转化实验 | 第25-26页 |
| 2.2.3 PCR鉴定 | 第26页 |
| 2.2.4 转座子插入稳定性检测 | 第26页 |
| 2.3 实验结果 | 第26-28页 |
| 2.3.1 08 M株对Gm的MIC测定结果 | 第26-27页 |
| 2.3.2 电转化实验结果 | 第27页 |
| 2.3.3 PCR鉴定及稳定性检测结果 | 第27-28页 |
| 2.4 讨论 | 第28-30页 |
| 第三章 突变株的Southern-blot鉴定 | 第30-39页 |
| 3.1 实验材料 | 第30-31页 |
| 3.1.1 主要试剂 | 第30页 |
| 3.1.2 主要仪器 | 第30页 |
| 3.1.3 主要溶液的配制 | 第30-31页 |
| 3.2 实验方法 | 第31-34页 |
| 3.2.1 08 M突变株及野生型基因组DNA的提取 | 第31页 |
| 3.2.2 探针的制备、纯化及标记效率检测 | 第31页 |
| 3.2.3 突变株DNA双酶切及电泳 | 第31-32页 |
| 3.2.4 转膜与DNA固定 | 第32-33页 |
| 3.2.5 杂交及免疫检测 | 第33-34页 |
| 3.3 实验结果 | 第34-37页 |
| 3.3.1 08 M突变株及野生型基因组DNA的提取结果 | 第34-35页 |
| 3.3.2 探针的制备、纯化及标记效率检测结果 | 第35页 |
| 3.3.3 突变株DNA双酶切及电泳结果 | 第35-36页 |
| 3.3.4 转膜与DNA固定结果 | 第36-37页 |
| 3.3.5 杂交及免疫检测结果 | 第37页 |
| 3.4 讨论 | 第37-39页 |
| 第四章 毒力基因突变株的初步筛选 | 第39-45页 |
| 4.1 实验材料 | 第39页 |
| 4.1.1 主要试剂 | 第39页 |
| 4.1.2 主要仪器 | 第39页 |
| 4.2 实验方法 | 第39-41页 |
| 4.2.1 引物的设计合成与鉴定 | 第39-41页 |
| 4.2.2 样品的处理 | 第41页 |
| 4.2.3 大海捞针筛选法 | 第41页 |
| 4.3 实验结果 | 第41-44页 |
| 4.3.1 引物的设计、合成与鉴定结果 | 第41-43页 |
| 4.3.2 筛选结果 | 第43-44页 |
| 4.4 讨论 | 第44-45页 |
| 第五章 全文结论 | 第45-46页 |
| 参考文献 | 第46-52页 |
| 致谢 | 第52-53页 |
| 作者简历 | 第53页 |