| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-7页 |
| 第1章 文献综述 | 第12-20页 |
| 1.1 菘蓝的研究概况 | 第12-13页 |
| 1.1.1 菘蓝的生物学特性 | 第12页 |
| 1.1.2 菘蓝的化学成分 | 第12页 |
| 1.1.3 菘蓝的药理活性 | 第12-13页 |
| 1.2 生长素(IAA)的研究概况 | 第13-17页 |
| 1.2.1 IAA的化学结构及生物学功能 | 第13-15页 |
| 1.2.2 IAA的合成途径 | 第15-17页 |
| 1.3 YUCCA基因研究进展 | 第17-19页 |
| 1.3.1 拟南芥YUCCA基因的研究进展 | 第17-18页 |
| 1.3.2 其他物种中YUCCA基因的研究进展 | 第18-19页 |
| 1.4 本研究的目的及意义 | 第19-20页 |
| 第2章 基于qRT-PCR技术的菘蓝内参基因的筛选 | 第20-30页 |
| 2.1 实验材料、试剂与仪器 | 第20-21页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第20页 |
| 2.1.2 实验试剂 | 第20-21页 |
| 2.1.3 实验仪器 | 第21页 |
| 2.2 实验方法 | 第21-24页 |
| 2.2.1 材料处理 | 第21页 |
| 2.2.2 RNA提取 | 第21-22页 |
| 2.2.3 cDNA合成 | 第22页 |
| 2.2.4 序列查找及引物设计 | 第22-24页 |
| 2.2.5 候选内参基因的引物特异性及扩增效率分析 | 第24页 |
| 2.2.6 内参基因的qRT-PCR分析 | 第24页 |
| 2.2.7 geNorm和NormFinder软件分析候选内参基因的表达稳定性 | 第24页 |
| 2.3 结果与分析 | 第24-28页 |
| 2.3.1 10个候选内参基因的引物特异性分析结果 | 第24-25页 |
| 2.3.2 10个候选内参基因的引物扩增效率分析 | 第25-26页 |
| 2.3.3 10个候选内参基因的qRT-PCR及原始ct值分析 | 第26页 |
| 2.3.4 最适内参基因的筛选 | 第26-28页 |
| 2.4 讨论 | 第28-30页 |
| 第3章 菘蓝YUCCA家族基因的表达模式研究 | 第30-40页 |
| 3.1 实验材料、试剂与仪器 | 第30页 |
| 3.2 实验方法 | 第30-31页 |
| 3.2.1 材料处理 | 第30页 |
| 3.2.2 RNA提取和cDNA的合成 | 第30页 |
| 3.2.3 序列查找及引物设计 | 第30-31页 |
| 3.3 结果与分析 | 第31-37页 |
| 3.3.1 菘蓝YUCCA家族相关基因在不同组织部位的表达模式分析 | 第31-32页 |
| 3.3.2 菘蓝YUCCA家族相关基因在不同发育阶段的表达模式分析 | 第32-33页 |
| 3.3.3 干旱对菘蓝YUCCA家族相关基因表达的影响 | 第33-34页 |
| 3.3.4 盐胁迫对菘蓝YUCCA家族相关基因的表达的影响 | 第34-35页 |
| 3.3.5 伤害处理对菘蓝YUCCA家族相关基因表达的影响 | 第35-36页 |
| 3.3.6 低温处理对菘蓝YUCCA家族相关基因表达的影响 | 第36-37页 |
| 3.4 讨论 | 第37-40页 |
| 第4章 菘蓝IiYUCCA6基因的克隆及生物信息学分析 | 第40-50页 |
| 4.1 实验材料、试剂与仪器 | 第40页 |
| 4.1.1 植物材料 | 第40页 |
| 4.1.2 实验试剂及菌株 | 第40页 |
| 4.1.3 实验仪器 | 第40页 |
| 4.2 实验方法 | 第40-43页 |
| 4.2.1 菘蓝总RNA的提取及cDNA的合成 | 第40-41页 |
| 4.2.2 菘蓝基因组DNA的提取 | 第41页 |
| 4.2.3 菘蓝IiYUCCA6基因的克隆 | 第41-43页 |
| 4.2.4 菘蓝IiYUCCA6基因的生物信息学分析 | 第43页 |
| 4.3 结果与分析 | 第43-47页 |
| 4.3.1 IiYUCCA6基因的克隆 | 第43-44页 |
| 4.3.2 IiYUCCA6编码蛋白的理化性质分析 | 第44-45页 |
| 4.3.3 IiYUCCA6编码蛋白的结构预测 | 第45页 |
| 4.3.4 IiYUCCA6编码蛋白的二级和三级结构预测 | 第45-46页 |
| 4.3.5 IiYUCCA6同源蛋白的多序列比对及其系统进化分析 | 第46-47页 |
| 4.4 讨论 | 第47-50页 |
| 第5章 菘蓝IiYUCCA6基因的亚细胞定位研究 | 第50-58页 |
| 5.1 实验材料、试剂与仪器 | 第50-51页 |
| 5.1.1 实验材料 | 第50页 |
| 5.1.2 实验试剂 | 第50页 |
| 5.1.3 实验仪器 | 第50-51页 |
| 5.2 实验方法 | 第51-54页 |
| 5.2.1 引物设计及PCR扩增 | 第51页 |
| 5.2.2 目的片段的获得及与克隆载体的连接 | 第51-52页 |
| 5.2.3 亚细胞定位载体的构建 | 第52-53页 |
| 5.2.4 重组质粒对农杆菌的转化 | 第53页 |
| 5.2.5 liYUCCA6基因对洋葱表皮细胞的瞬时转染 | 第53-54页 |
| 5.3 结果与分析 | 第54-55页 |
| 5.3.1 liYUCCA6基因亚细胞定位载体的构建 | 第54页 |
| 5.3.2 liYUCCA6基因在洋葱表皮细胞中的亚细胞定位分析 | 第54-55页 |
| 5.4 讨论 | 第55-58页 |
| 第6章 菘蓝IiYUCCA6基因的原核表达研究 | 第58-68页 |
| 6.1 实验试剂与仪器 | 第58-59页 |
| 6.1.1 质粒、菌株及试剂 | 第58页 |
| 6.1.2 相关溶液配制 | 第58-59页 |
| 6.2 实验方法 | 第59-63页 |
| 6.2.1 引物设计及PCR扩增 | 第59-60页 |
| 6.2.2 目的片段的获得及与克隆载体的连接 | 第60页 |
| 6.2.3 原核表达载体的构建及其鉴定 | 第60-61页 |
| 6.2.4 原核表达载体转化大肠杆菌BL21 (DE3) | 第61页 |
| 6.2.5 融合蛋白的诱导表达及表达条件的优化 | 第61-62页 |
| 6.2.6 重组蛋白表达形式的确定 | 第62页 |
| 6.2.7 可溶性融合蛋白的富集与纯化 | 第62-63页 |
| 6.3 结果分析 | 第63-67页 |
| 6.3.1 IiYUCCA6基因原核表达载体的构建 | 第63页 |
| 6.3.2 诱导融合蛋白表达条件的建立 | 第63-65页 |
| 6.3.3 融合蛋白诱导表达形式的确定 | 第65-66页 |
| 6.3.4 可溶性融合蛋白的纯化结果 | 第66-67页 |
| 6.4 讨论 | 第67-68页 |
| 第7章 菘蓝IiYUCCA6基因在烟草中的异源表达研究 | 第68-82页 |
| 7.1 实验材料与试剂 | 第68-69页 |
| 7.1.1 植物材料 | 第68页 |
| 7.1.2 菌株和质粒 | 第68页 |
| 7.1.3 试剂与药品 | 第68页 |
| 7.1.4 实验仪器 | 第68-69页 |
| 7.2 实验方法 | 第69-74页 |
| 7.2.1 过表达载体的构建 | 第69-70页 |
| 7.2.2 重组质粒转化农杆菌GV3101及遗传转化体系的构建 | 第70页 |
| 7.2.3 转基因烟草株系的分子水平鉴定 | 第70-71页 |
| 7.2.4 转基因烟草株系的表型观察 | 第71-72页 |
| 7.2.5 转基因烟草株系IAA含量的检测 | 第72页 |
| 7.2.6 转基因烟草中IAA响应基因的表达水平测定 | 第72页 |
| 7.2.7 黑暗胁迫处理条件下转基因烟草生理生化指标的测定 | 第72-74页 |
| 7.3 结果与分析 | 第74-79页 |
| 7.3.1 过表达载体的构建 | 第74页 |
| 7.3.2 转基因烟草株系的分子水平检测结果 | 第74-75页 |
| 7.3.3 转基因烟草的表型观察与分析 | 第75-76页 |
| 7.3.4 转基因烟草株系中IAA含量的测定 | 第76-77页 |
| 7.3.5 转基因烟草IAA响应基因的表达分析 | 第77-78页 |
| 7.3.6 黑暗胁迫处理对转基因烟草株系生理生化指标的影响 | 第78-79页 |
| 7.4 讨论 | 第79-82页 |
| 第8章 结论 | 第82-84页 |
| 参考文献 | 第84-96页 |
| 致谢 | 第96-98页 |
| 攻读硕士学位期间研究成果 | 第98页 |
