| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-7页 |
| 第1章 综述 | 第12-22页 |
| 1.1 丹参概述 | 第12-14页 |
| 1.1.1 丹参的生物学特性 | 第12页 |
| 1.1.2 丹参的药理作用 | 第12页 |
| 1.1.3 丹参的生物活性成分 | 第12-14页 |
| 1.2 丹参中丹参酮和酚酸的生物合成途径研究 | 第14-18页 |
| 1.2.1 丹参酮生物合成途径研究 | 第14-15页 |
| 1.2.2 丹酚酸生物合成途径研究 | 第15-18页 |
| 1.3 bHLH转录因子家族研究进展 | 第18-20页 |
| 1.3.1 植物bHLH转录因子家族研究进展 | 第18-19页 |
| 1.3.2 丹参bHLH转录因子家族研究进展 | 第19页 |
| 1.3.3 植物JAM蛋白研究进展 | 第19-20页 |
| 1.4 本研究的目的和意义 | 第20-22页 |
| 第2章 丹参SmbHLH53基因的克隆和表达分析 | 第22-34页 |
| 2.1 实验材料、试剂及仪器 | 第22-23页 |
| 2.1.1 实验材料 | 第22页 |
| 2.1.2 试剂与药品 | 第22页 |
| 2.1.3 仪器与设备 | 第22-23页 |
| 2.2 实验方法 | 第23-25页 |
| 2.2.1 材料处理方法 | 第23页 |
| 2.2.2 核酸提取 | 第23页 |
| 2.2.3 丹参SmbHLH53基因的克隆 | 第23-24页 |
| 2.2.4 SmbHLH53的生物信息学分析 | 第24页 |
| 2.2.5 SmbHLH53的表达分析 | 第24-25页 |
| 2.3 结果与分析 | 第25-28页 |
| 2.3.1 SmbHLH53基因的克隆结果 | 第25页 |
| 2.3.2 SmbHLH53生物信息学分析结果 | 第25-27页 |
| 2.3.3 SmbHLH53编码蛋白的同源性及系统发育分析 | 第27页 |
| 2.3.4 SmbHLH53基因的表达模式分析 | 第27-28页 |
| 2.4 讨论 | 第28-34页 |
| 第3章 丹参SmbHLH53与丹参SmJAZs蛋白的互作研究 | 第34-48页 |
| 3.1 实验材料、试剂及仪器 | 第34-35页 |
| 3.1.1 实验材料 | 第34页 |
| 3.1.2 实验载体 | 第34页 |
| 3.1.3 试剂与药品 | 第34-35页 |
| 3.1.4 仪器与设备 | 第35页 |
| 3.2 实验方法 | 第35-42页 |
| 3.2.1 主要试剂配制 | 第35-36页 |
| 3.2.2 SmbHLH53亚细胞定位载体的构建 | 第36-37页 |
| 3.2.3 SmbHLH53蛋白在洋葱表皮细胞的亚细胞定位(基因枪轰击法) | 第37-38页 |
| 3.2.4 SmbHLH53酵母表达载体的构建 | 第38-39页 |
| 3.2.5 酵母双杂交验证SmbHLH53蛋白可以形成同源二聚体 | 第39-40页 |
| 3.2.6 酵母双杂交验证SmbHLH53与SmJAZs的互作 | 第40页 |
| 3.2.7 SmbHLH53和SmJAZs双分子荧光互补(BiFC)表达载体的构建 | 第40-41页 |
| 3.2.8 双分子荧光互补(BiFC)验证SmbHLH53和SmJAZs的互作 | 第41-42页 |
| 3.3 结果与分析 | 第42-46页 |
| 3.3.1 SmbHLH53亚细胞定位载体的构建结果及亚细胞定位结果 | 第42-43页 |
| 3.3.2 SmbHLH53酵母双杂交载体与BiFC实验载体的构建结果 | 第43-44页 |
| 3.3.3 SmbHLH53蛋白形成同源二聚体 | 第44页 |
| 3.3.4 SmbHLH53和SmJAZs的互作结果 | 第44-46页 |
| 3.4 讨论 | 第46-48页 |
| 第4章 SmbHLH53过表达转基因丹参的获得 | 第48-56页 |
| 4.1 实验材料、试剂及仪器 | 第48-49页 |
| 4.1.1 实验材料 | 第48页 |
| 4.1.2 载体与菌株 | 第48页 |
| 4.1.3 试剂与药品 | 第48页 |
| 4.1.4 仪器与设备 | 第48-49页 |
| 4.2 实验方法 | 第49-51页 |
| 4.2.1 材料处理 | 第49页 |
| 4.2.2 SmbHLH53基因过表达载体的构建 | 第49页 |
| 4.2.3 农杆菌EHA105介导的叶盘法转化丹参 | 第49-50页 |
| 4.2.4 SmbHLH53转基因株系的DNA水平检测 | 第50-51页 |
| 4.2.5 SmbHLH53转基因株系的转录水平检测 | 第51页 |
| 4.3 结果与分析 | 第51-53页 |
| 4.3.1 SmbHLH53基因过表达载体的验证 | 第51-52页 |
| 4.3.2 SmbHLH53转基因株系的DNA水平检测 | 第52页 |
| 4.3.3 SmbHLH53转基因株系的RNA水平检测 | 第52-53页 |
| 4.4 讨论 | 第53-56页 |
| 第5章 转基因丹参中次生代谢产物含量测定 | 第56-62页 |
| 5.1 实验材料、试剂及仪器 | 第56页 |
| 5.1.1 实验材料 | 第56页 |
| 5.1.2 试剂与药品 | 第56页 |
| 5.1.3 仪器与设备 | 第56页 |
| 5.2 实验方法 | 第56-58页 |
| 5.2.1 材料处理方法 | 第56-57页 |
| 5.2.2 总酚、总黄酮含量的测定 | 第57页 |
| 5.2.3 LC-MS对照品溶液的制备 | 第57页 |
| 5.2.4 LC-MS条件 | 第57-58页 |
| 5.3 结果与分析 | 第58-61页 |
| 5.3.1 转基因丹参株系中总酚酸、总黄酮含量测定 | 第58页 |
| 5.3.2 转基因丹参株系中丹酚酸B、迷迭香酸含量测定 | 第58-59页 |
| 5.3.3 转基因丹参株系中丹参酮ⅡA、隐丹参酮含量测定 | 第59-61页 |
| 5.4 讨论 | 第61-62页 |
| 第6章 转基因株系及对照株系的转录组分析 | 第62-74页 |
| 6.1 实验材料与仪器 | 第62页 |
| 6.1.1 植物材料 | 第62页 |
| 6.1.2 试剂与药品 | 第62页 |
| 6.1.3 实验仪器 | 第62页 |
| 6.2 实验方法 | 第62-63页 |
| 6.2.1 OE-6转基因株系及CK株系cDNA文库的构建 | 第62-63页 |
| 6.2.2 差异表达基因(DEGs)的分析 | 第63页 |
| 6.3 结果与分析 | 第63-71页 |
| 6.3.1 OE-6转基因株系及CK株系转录组比较 | 第63页 |
| 6.3.2 差异表达基因的GO富集分析和KEGG途径富集分析 | 第63-69页 |
| 6.3.3 酚酸类物质合成通路中的差异表达基因 | 第69页 |
| 6.3.4 丹参酮类合成通路上的差异表达基因 | 第69-71页 |
| 6.4 讨论 | 第71-74页 |
| 第7章 结论 | 第74-76页 |
| 参考文献 | 第76-86页 |
| 致谢 | 第86-88页 |
| 攻读硕士学位期间科研成果 | 第88页 |
